论文题目: 屋尘螨过敏原转染树突状细胞诱导哮喘小鼠免疫耐受的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 内科学
作者: 吴奎
导师: 王长征
关键词: 疫苗,变应原,免疫治疗,尘螨,树突状细胞,免疫耐受,调节性细胞
文献来源: 第三军医大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:“Th1/Th2偏移”假说是哮喘发病的主要免疫学机制,但近年的研究发现该学说不能完全解释哮喘的免疫学机制异常,提出了哮喘是一种对过敏原免疫耐受缺陷的疾患,其中树突状细胞(DCs)可能是关键的调节因素之一。本实验拟构建尘螨主要变应原基因转染的DCs,研究基因屋尘螨转染DCs诱导哮喘小鼠对致敏抗原的免疫耐受作用和机制。研究内容:1、分离小鼠骨髓后体外培养扩增DCs。2、将屋尘螨主要过敏原Der p1、Der p2真核表达质粒转染DCs,构建过敏原转染DCs,观察过敏原基因转染对DCs表面分子和炎性介质分泌的影响;3、建立屋尘螨提取液致敏/激发小鼠的肺部变应性炎性模型。4、观察屋尘螨过敏原转染DCs对小鼠脾脏淋巴细胞中调节性T细胞及肺泡灌洗液中细胞因子、肺组织病理变化的影响。5、观察清除调节性T细胞对屋尘螨转染DCs作用的影响方法:1、分离小鼠骨髓细胞,在含GM-CSF的完全培养基进行培养。以流式细胞仪鉴定培养细胞表面分子CD8α、CD11c、MHC II分子。2、将携带有屋尘螨主要过敏原Der p1、Der p2的pDs-Der p1、pCIneo-Der p2质粒转化入大肠杆菌DH5α后大量扩增抽提质粒。以Lipofectamine 2000分别将此二质粒转染DCs后,以流式细胞仪检测其细胞表面分子CD40、CD80、CD86、MHC II的变化。采用ELISA方法检测转染后DCs分泌IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ和TGF-β1的变化,采用RT-PCR方法检测Der p1、Der p2在DCs内的表达。3、用尘螨提取液经腹腔和皮下注射途径致敏C57BL/6小鼠,14天后滴鼻激发,建立尘螨致敏小鼠肺部变应性炎症模型。4、分离哮喘小鼠和正常小鼠脾脏CD4+T细胞分别加入屋尘螨转染DCs和非转染DCs进行共培养后,检测上清液中IL-4、IL-10、IFN-γ含量的变化,观察屋尘螨转染
论文目录:
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论文正文 屋尘螨过敏原重组树突状细胞诱导哮喘小鼠免疫耐受的研究
前言
第一部分 屋尘螨重组 D C s 的构建以及基因转染对 D C s 表面分子和细胞因子分泌的影响
第一节
材料与方法
结果
讨论
第二节
材料与方法
结果
讨论
第二部分 屋尘螨主要过敏原重组 D C 对哮喘小鼠肺部变应性炎症及 C D 4 + C D 2 5 + 调节性 T 细胞的影响
第一节
材料和方法
结果
讨论
第二节
材料和方法
结果
讨论
第三节
材料和方法
结果
讨论
第四节
材料与方法
结果
讨论
全文结论
参考文献
致谢
照片
文献综述一 调节性 T 细胞与过敏原特异性免疫治疗
参考文献
文献综述二 屋尘螨主要过敏原 Der p1 研究进展
参考文献
发布时间: 2006-10-19
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