论文摘要
目的：帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是好发于中老年以上的中枢神经系统退行性疾病，其病理变化主要是黑质纹状体多巴胺（Dopamine，DA）能神经元进行性减少、残存神经元胞浆内形成路易小体（Lewy’s Body，LB），临床上以进行性加重的运动缓慢、肌强直、静止性震颤、姿势步态异常、表情减少为特征。目前PD治疗采用药物替代治疗、外科手术治疗、基因移植治疗等，但由于不能有效阻止或减缓疾病的发展、手术创伤大、移植细胞存活周期短等原因限制了临床运用。近年来，针灸作为一种独特的整体治疗方法，在治疗早期PD方面取得了可喜的成绩，已经被越来越多地运用于PD治疗中。本课题研究电针对PD大鼠旋转行为、黑质谷胱甘肽含量（Glutathione，GSH）、黑质超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutahione peroxide，GSH-Px）活性、黑质脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor，BDNF）及其受体酪氨酸激酶B（Tyrosine kinase-B，TrkB）表达的影响，探讨电针对PD治疗作用及其作用机理，为针灸临床提供实验依据。方法：本课题共用Wistar大鼠90只，随机分为正常组16只、假手术组20只。采用右侧黑质注射微量6-羟基多巴胺（6-hydroxy dopamine，6-OHDA）诱导PD大鼠模型，假手术组注射等体积的生理盐水。造模4周后，腹腔注射阿扑吗啡（Apomorphine，APO）（0.5mg／kg）诱发旋转，记录其30min内的旋转次数，超过7转／min即为成功PD模型，将造模成功的大鼠随机分成两组，即模型组、电针组。电针组取风府穴、太冲穴（双侧）进行治疗，双侧太冲穴用28号0.5寸不锈钢毫针针刺，风府穴用28号1寸不锈钢毫针针刺，接G6805-2型电针治疗仪（右侧太冲穴与风府穴为一对电极），连续波，频率100Hz，强度1mA，留针15min，每天1次，6天为1疗程，疗程间隔1天，治疗2疗程，治疗结束后进行各指标检测。1．行为学检测治疗结束后开始行为学检测，给受试大鼠腹腔注射APO（0.5mg／Kg），以诱发大鼠向健侧（左侧）单向旋转。每次在注射AP015min后开始记录，共记录30min内旋转圈数，每周2次，连续2周。2．SOD、GSH-Px活性及GSH含量于冰台上分离右侧黑质，称重后用手工匀浆法制成10％组织匀浆，3000r／min离心45min，取上清液，配制成适当的浓度分别测定其相应的值。3．BDNF表达免疫组化测定采用SABC法。取上述切片，分别作常规免疫组化检测BDNF阳性神经元个数，阳性神经元判断标准：细胞浆呈棕褐色。4．TrKB表达免疫组化测定采用SABC法。取上述切片，分别作常规免疫组化检测TrKB阳性神经元个数，阳性神经元判断标准：细胞浆呈黄褐色。5．检测值统计处理的结果用均数±标准差（（?）±s）表示，SPSS11.0软件包处理。结果：1．PD电针组大鼠治疗后较治疗前旋转次数明显减少（P＜0.05），模型组无变化（P＞0.05）。2．PD模型组右侧黑质SOD、GSH、GSH-Px均不同程度低于正常组（P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01），电针使其有不同程度升高（P＜0.01、P＜0.01、P＜0.05）。3．PD模型组右侧黑质BDNF明显低于正常组、假手术组（P＜0.01），电针使其含量增加（P＜0.05）。4．PD模型组右侧黑质TrKB明显低于正常组、假手术组（P＜0.01），电针使其含量增加（P＜0.05）。结论：BDNF不仅在中枢神经系统发育过程中对DA神经元的生存、分化、生长和维持神经元正常的生理功能起关键作用，而且还具有抗伤害性刺激，促进神经元损伤后的再生等作用。氧化应激反应在PD发病中起着重要作用，可引起蛋白质、脂质过氧化损害和DNA断裂，导致DA能神经元发生凋亡，引起脑内DA含量减少。本实验证实电针可明显改善PD大鼠的旋转行为，可增强黑质SOD、GSH-Px的活性，增加黑质中BDNF和TrKB的含量，提示电针治疗PD的作用可能是通过以下途径实现：①增强机体的抗氧化能力，减少自由基生成，减轻脂质过氧化作用，防止DA神经元凋亡。②增加黑质中BDNF和TrKB的含量，发挥DA神经元的保护作用，促进神经元损伤后的再生。