高原鼢鼠药用价值及分子机制研究

论文题目: 高原鼢鼠药用价值及分子机制研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 遗传学

作者: 潘明

导师: 杨志荣

关键词: 塞隆骨,提取,成骨样细胞,骨代谢,细胞因子,基因差异表达,高原鼢鼠肌肉,酶解,免疫功能

文献来源: 四川大学

发表年度: 2005

论文摘要: 高原鼢鼠（Myospalaxbaileyi）属仓鼠科（Cricetidae.）鼢鼠亚科,鼢鼠属（Myospalax）,是栖息于青藏高原,危害草场和农田的地下啮齿动物。它是青藏高原草地生态系统中危害最为严重的啮齿类之一。由于其取食和挖掘活动,每年青藏高原的鼢鼠危害面积达数百万公顷,经济损失惨重。 塞隆骨为高原鼢鼠的干燥全骨架,是卫生部于1990年批准的（批准文号:〈90〉卫药试字Z33号）中药第一类新药材,研究发现其药理作用与虎骨有类似之处,主治风寒湿痹引起的肢体关节疼痛、肿胀、肌肤麻木、腰膝酸软（张宝琛,1996）。因此,是市场上许多成品中药的重要成分,如“塞隆风湿酒”、“塞雪风湿胶囊”、“晶珠风湿胶囊”等等。但其药用价值和作用机理的研究还不够深入,未研究具体的有效成分,对其作用机制、量效关系、时效关系和药代动力学探讨较少,其毒副作用未见报道。 本论文以高原鼢鼠为研究对象,提取塞隆骨的脂提物、醇提物、水提物和骨胶,制备塞隆骨水煎剂,探讨塞隆骨的药用价值;并利用生物酶水解高原鼢鼠肌肉,以期对高原鼢鼠进行综合开发利用,提高其经济价值和社会意义。 以大鼠成骨样细胞ROS17/2.8为细胞模型,通过MTT法、ALP活性检测、ALP染色、通过流式细胞仪测定成骨样细胞钙离子摄取,及用茜素红S法来对矿化结节计数观察对塞隆骨提取物成骨样细胞矿化功能的影响,在细胞水平上分析塞隆骨不同的提取组分对成骨样细胞ROS17/2.8增殖、分化、矿化的效果,并以激素类药物地塞米松作阳性对照。结果表明:塞隆骨脂提取物1×10-2（g/ml）组、塞隆骨水煎液1×10-2（g/ml）组、塞隆骨骨胶1×10-2（g/ml）、1×10-2（g/ml）组对成骨样细胞的增殖均较阳性、空白对照组强,且显著强于空白对照组

论文目录:

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英文摘要

文献综述

高原鼢鼠的研究与应用进展

一、鼢鼠简介

1、鼢鼠分类概述

2、鼢鼠的分布

3、鼢鼠的地理区划

4、高原鼢鼠的特点

二、鼢鼠对天然草场的危害与防治

1、高原鼢鼠危害的现状

2、鼢鼠的灭治途径及效果

三、鼢鼠在民间的利用

四、高原鼢鼠的营养成分

1.脂类物质

2.高原鼢鼠肌肉中的脂溶性物质

3.氨基酸

4.矿质元素

五、高原鼢鼠的应用

1、鼢鼠骨的应用

2、鼢鼠的脂溶性成分的应用

3、鼢鼠肉的应用

六、展望

参考文献

动物药材研究进展

第一节 药用动物在我国应用的历史和发展概况

第二节 我国的药用动物资源

第三节 现代技术在动物类中药鉴别的应用

1 扫描电镜技术

2 红外光谱技术

3、热分析技术

4、X衍射技术

5、分子生物学技术

第四节 动物药材的种类和化学成分

第五节 动物药材的药理功能

1 对血液和造血系统的影响

2 对免疫系统功能的影响

3 对消化系统的作用

第六节 动物药材的应用

展望

参考文献

第一章 塞隆骨提取物的制备

摘要

关键词

前言

1 材料与方法

2 结果

2.1 塞隆骨超临界CO2萃取结果

2.2 750mL／L乙醇提取结果

2.3 蒸馏水回流提取结果

2.4 塞隆骨水煎液的提取结果

2.5 骨胶提取物提取结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第二章 在细胞水平上探讨塞隆骨治疗骨质疏松的机理

第一节 塞隆骨提取物对体外成骨样细胞增殖的影响

前言

1 材料与方法

2 结果

2.1 塞隆骨水煎液对成骨样细胞增殖的影响

2.2 塞隆骨脂、醇、水提物及水煎液对大鼠成骨样细胞ROS17／2.8增殖结果

2.3 塞隆骨脂、骨胶提取物、水煎液及地塞米松对大鼠成骨样细胞ROS17／2.8增殖的结果

3 讨论

4 小结

第二节 塞隆骨提取物对体外成骨样细胞分化的影响

摘要

1 材料与方法

2 实验方法

2.1 碱性磷酸酶(ALP)活性的测定

2.2 不同塞隆骨提取物的成骨样细胞碱性磷酸酶染色

2.3 统计学处理

3 结果

3.1 碱性磷酸酶(ALP)活性的测定结果

3.2 ALP染色结果

4.讨论

5.小结

第三节 塞隆骨提取物对成骨细胞体外钙化能力的研究

摘要

关键词

前言

1.材料与方法

2.实验方法

2.1 钙结节染色计数

2.2 成骨样细胞对钙离子的摄取能力

3.结果

3.1 塞隆骨各提取物对成骨细胞矿化能力的影响

3.2 塞隆骨各提取物对钙离子摄取能力的影响

4 讨论

5 小结

参考文献

第三章 塞隆骨提取物对成骨样细胞凋亡及细胞因子的机理研究

第一节 塞隆骨提取物对抑制成骨样细胞凋亡机制探讨

摘要

关键词

前言

1 材料与方法

2 实验方法

2.1 细胞培养

2.2 琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞

2.3 流式细胞仪检测凋亡比例

3 结果

3.1 DNA凝胶电泳结果

3.2 流式细胞仪检测凋亡比例

4 讨论

5 小结

第二节 塞隆骨提取物对成骨样细胞分泌IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10及干扰素IFN-γ的影响

摘要

关键词

前言

1.试剂及试剂盒

2.实验方法

3.结果

4.讨论

5.小结

参考文献

第四章 塞隆骨提取物对COX、Ⅳ型胶原酶活性以及对NF-kb因子的影响

摘要

关键词

前言

1 材料和方法

2 结果

2.1 MMPS明胶电泳实验结果

2.2 NF-kb活化结果

2.3 化学荧光COX抑制剂筛选实验结果

3 讨论：

4 小结

参考文献

第五章 塞隆骨提取物质对骨质疏松相关基因的差异表达

摘要

关键词

前言

1.试剂及试剂盒

2.实验方法

2.1 大鼠成骨样细胞ROS17／2.8的培养

2.2 实验分组

2.3 细胞内总RNA抽提

2.4 引物设计

2.5 反应过程

3 结论

参考文献

第六章 高原鼢鼠肉酶解工艺优化及免疫功能探讨

第一节 高原鼢鼠肉营养成分分析及评价

摘要

关键词

前言

1.材料与方法

2.结果

2.1 高原鼢鼠肉主要营养成分与维生素含量

2.2 高原鼢鼠肉氨基酸含量及组成

2.3 高原鼢鼠肉的氨基酸分

2.4 高原鼢鼠肉脂肪酸含量及评价

2.5 高原鼢鼠肉矿物质成分及含量

3.讨论

4.小结

第二节 高原鼢鼠肉蛋白的木瓜蛋白酶水解优化研究

摘要

关键词

前言

1 材料与方法

2 结果与讨论

2.1 酶的筛选

2.2 加酶量对水解度的影响

2.3 酶解时间对水解度的影响

2.4 pH对水解度的影响

2.5 温度对水解度的影响

2.6 固液比对水解度的影响

2.7 正交试验

2.8 水解液的成分分析

3 结论

第三节 高原鼢鼠肉蛋白的木瓜蛋白酶酶解物对小鼠免疫功能的影响

摘要

前言

1 材料与方法

2.实验方法

3.结果

3.1 T淋巴细胞增殖的结果

3.2 酶解液对对小鼠NK细胞活性的影响

3.3 酶解液对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

3.4 酶解液对正常小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响

3.5 酶解液对对小鼠特异性体液免疫功能的影响

4.讨论

5.小结

参考文献

全文总结

致谢

在读期间发表论文、申请专利及获奖情况

声明

发布时间: 2005-10-08

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