论文摘要
目的：本研究拟通过对人牙周膜成纤维细胞的原代培养,探讨其生物学特性,研究脂联素受体在人牙周膜成纤维细胞的表达情况,以及脂联素对人牙周膜成纤维细胞增殖的作用,为牙周组织再生的应用提供理论依据。方法：1.收集12～16岁因正畸需要而拔除的健康前磨牙10颗,无菌条件下刮取根中1/3的牙周膜组织,采用玻片覆盖组织块法进行牙周膜细胞的原代培养,对人牙周膜组织细胞进行体外传代及分离纯化,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化及生长增殖情况,并对所生长细胞的生物学特性进行免疫组化鉴定,取第三至五代用于实验.2.检索Pubmed homorogene,查找脂联素受体(Adipo R)引物序列,Adipo R引物由上海生工有限公司合成。抽提牙周膜成纤维细胞总RNA,逆转录合成cDNA后,PCR扩增目的片段,琼脂糖凝胶电泳检测分析AdipoR1和AdipoR2在人牙周膜成纤维中的表达情况。3.选择免疫组化鉴定为牙周膜成纤维细胞的同一组织来源培养的第4,5代牙周膜成纤维细胞,以2×104/ml的细胞浓度分别接种于96孔板中,24小时后分别加入脂联素(0,5,10,20ng／μl),采用四唑盐比色法(MTT)法,分别测第1,4,7天的细胞增殖活性。结果：1.玻片覆盖组织块法分离培养的细胞在体外具有良好的增殖能力。免疫组化实验显示细胞波形丝蛋白染色呈阳性；角蛋白染色呈阴性,证明体外原代培养细胞及传代细胞均为中胚层组织来源的牙周膜成纤维细胞,且无上皮来源细胞混杂。2.琼脂糖凝胶电泳检测显示：Adipo R2在人牙周膜成纤维细胞中有阳性表达。3通过四唑盐比色法(MTT)法,初步测定脂联素在一定浓度范围内对人牙周膜成纤维细胞增殖具有促进作用。(P<0.05)。结论：1.采用玻片覆盖组织块法体外原代培养的牙周膜细胞,具有良好的增殖能力；2.运用分子生物学检测方法发现AdipoR2不仅在肝脏中表达,在牙周组织中亦有表达；3.初步提示脂联素在一定浓度范围内可提高牙周膜成纤维细胞的增殖活性,为进一步研究脂联素对人牙周膜成纤维细胞增殖、分化、炎症因子表达及破骨细胞相关调节因子表达的作用奠定了基础。
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标签：细胞培养论文; 牙周膜成纤维细胞论文; 脂联素论文; 脂联素受体论文; 细胞增殖论文;