应用组织芯片和细胞芯片技术研究肺癌中FHIT和相关蛋白的表达及其生物学意义

论文摘要

目的：本课题应用免疫组化方法研究FHIT、MSH2及P21在肺癌和癌前病变组织芯片及细胞芯片中的表达情况及其在肺癌中与各临床病理参数之间的关系，并研究了三种蛋白之间的相关性。希望为肺癌的发生、发展、治疗及判断预后提供理论依据；并进一步验证细胞芯片，为快速、简便、经济、规范地进行各项细胞学检查提供一种新方法。方法：应用免疫组织化学SP法检测270点组织芯片及112点细胞芯片中FHIT、MSH2及P21蛋白的表达，组织芯片包括原发肺癌89例，淋巴结转移性肺癌12例，肺癌癌前病变12例以及正常肺组织10例，并结合肺癌的临床病理特征进行分析；细胞芯片包括含有肿瘤细胞的肺癌患者的胸水50例、非肿瘤患者胸水6例。应用SPSS11.5版软件包进行数据处理。结果：1．FHIT蛋白阳性产物主要定位于胞浆。在原发性肺癌、癌前病变组织和淋巴结转移癌组织中失表达率分别为46.1％、41.7％和50.0％，而在10例正常肺组织中FHIT均有表达。原发性肺癌组、癌前病变组和转移癌组FHIT蛋白的失表达率均高于正常组（p＜0.05）；原发癌与转移癌、原发癌与癌前病变、癌前病变与转移癌之间FHIT表达差别无统计学意义（p＞0.05），且FHIT失表达与组织学类型，分化程度以及患者的吸烟史相关且有统计学意义（P＜0.05），而与性别，年龄，临床分期，是否伴有淋巴结转移以及肉眼类型无关（p＞0.05）。2．MSH2蛋白阳性产物主要定位于胞核。在正常组、癌前病变组织、原发性肺癌和淋巴结转移癌组织中失表达率分别为10％、33.3％、51.7％和50.0％，原发性肺癌组MSH2蛋白的失表达率高于正常组（p＜0.05）；正常组与癌前病变组、正常组与转移癌组、原发癌与转移癌、原发癌与癌前病变、癌前病变与转移癌之间FHIT表达差别无统计学意义（p＞0.05）。且MSH2的表达与分化程度有关。而与性别、年龄、肉眼类型、临床分期及是否伴有淋巴结转移无关（p＞0.05）。3．P21蛋白阳性产物主要定位于胞浆或核，在各组中的阳性率分别为：正常组90.0％，癌前病变组75.0％，原发性肺癌组44.9％，淋巴结转移性肺癌组25.0％；正常组和癌前病变组阳性率显著高于原发性肺癌组和淋巴结转移性肺癌组（p＜0.05），正常组与癌前病变组、原发性肺癌组与淋巴结转移性肺癌组之间阳性率差别无统计学意义（p＞0.05）。在原发性肺癌中P21蛋白的表达与分化程度、临床分期及有无淋巴结转移有关：其中高+中分化组高于低+未分化组（p＜0.05），且随着肿瘤恶性程度的增加P21表达有逐渐降低的趋势（p＜0.01）；Ⅰ期+Ⅱ期高于Ⅲ+Ⅳ期（p＜0.05），表达水平随着临床分期的进展而降低（p＜0.01）；无淋巴结转移组高于有淋巴结转移组（p＜0.05）；而与病人的年龄、性别、组织学类型及肉眼类型无关（均为p＞0.05）。4．经Spearman等级相关分析，三种蛋白在组织芯片中表达的相关关系结果为：FHIT与MSH2的表达呈明显正相关（rs=0.345，p＜0.01），FHIT与p21的表达无明显相关（p＞0.05）。5．用我们的方法制作出的细胞芯片排列整齐，分布均匀，无掉片，符合观察需要。HE染色镜下每点均可见具有诊断意义的肿瘤细胞，基本无重叠现象。检测结果与同时制作的相应涂片进行比较，结果完全一致。对细胞芯片进行了FHIT，MSH2，p21免疫组化染色后，细胞无明显减少，胞浆或胞核呈棕黄色颗粒状。所得阳性结果与各例相应涂片检测结果完全一致。将细胞芯片检测结果与进行FHIT，MSH2，p21免疫组化染色的组织芯片中Ⅲ+Ⅳ期肺癌的检测结果进行比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：1．FHIT、MSH2、P21基因在肺癌表达下降，提示他们参与肺癌的发生、发展。FHIT基因在癌前病变中表达下降，提示其改变可能是肺癌的早期分子事件。在鳞癌伴有吸烟史者中失表达率高，提示FHIT基因可能在与吸烟相关的肺癌形成过程中起一定作用。DNA错配修复基因MSH2表达强度与肺癌的分化程度呈正相关关系，肿瘤细胞分化程度越低，恶性程度越高，这提示MSH2蛋白的丢失与细胞获得恶性表型有关。P21蛋白在肺原发癌中，其表达强度与肺癌的分化程度呈正相关关系，随着肿瘤细胞分化程度的降低，P21蛋白表达降低，肿瘤细胞分化程度越低，恶性程度越高，且其表达强度还与肺癌的临床分期呈负相关，以及有无淋巴结转移有关。2．FHIT、MSH2蛋白表达之间存在一定的相关性，在肺癌的发生、发展、浸润、转移过程中发挥了协同作用。故联合检测二者表达可以弥补单项检测结果的不足，具有一定的理论意义。3．本研究通过应用免疫组化方法研究FHIT及其相关蛋白在组织芯片中的表达进一步验证每例取直径为0.6mm的2点即能够完全反映原组织的信息，同时进一步证实组织芯片的可行性及其优越性。4．应用免疫组化方法研究FHIT、MSH2及F21蛋自在细胞芯片中的表达情况，进一步验证我们细胞芯片的研制方法是可行的，完全可以用于形态学观察和蛋白表达方面的研究，细胞芯片可以替代细胞涂片进行临床诊断和科学研究，尤其在样本较多的情况下更显示其优越性。5．细胞芯片操作简单，节约试剂，减少实验误差，具有诊断快速准确，特异性高，信息量大的特点，在临床诊断、科研和流行病学筛选中将有广泛的应用前景。6．细胞芯片和组织芯片相比，细胞芯片虽不能提供组织学结构，但操作简便快速，且能广泛应用于脱落细胞学检测以及培养细胞的各项试验等，并能进行DNA倍体分析，将二者结合能更好地应用于科研。7．组织芯片和细胞芯片既保证了对原组织的代表性，又具有高通量、经济节约、减少实验误差等优点，在大样本研究中具有明显的优势，必将为广大科研工作者所应用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 发表论文和参加科研情况说明
• 致谢