牛精子分离和性控胚胎体外生产研究

论文摘要

本研究对比了三头种公牛精子的分离效果;评估分离和冷冻对精子活力,体外受精效果以及胚胎发育的影响。另外,比较了BO液和Precoll法处理分离冻精对体外受精后胚胎发育的影响。并采用双重荧光分染方法,对分离精子和未分离精子牛体外受精囊胚质量进行了评价。试验结果表明,不同种公牛个体间除分离准确率外,精子的分离速率和死精率都存在显著差异(4.1×10~3 vs 4.5×10~3 vs 5.3×10~3,19.3%vs14.5%vs 11.0%,P＜0.05)。精液体外培养10分钟时,鲜精组与分离精液组在精子活力无显著性差异(84.5%vs 83.4%,P＞0.05);但体外培养6小时,两组间出现了显著性差异(62.5%vs 55.4%,P＜0.05)。冷冻处理明显降低了分离和未分离精液的精子活力(分离83.4%vs 55.3%;未分离:84.5%vs 55.2%,P＜0.05);3头种公牛分离冻精组在4小时的精子活力明显低于未分离冻精组(9.1%vs 25.9%,22.1%vs 35.1%,21.5%vs 36.5%,P＜0.05)。因此,我们可以推断不同种公牛个体间精子的分离速率、死精率、以及对分离和冷冻处理的耐受性存在显著差异。分离处理对精子的损伤要小于冷冻处理,但是分离处理明显缩短了精子的受精存活时间,而且分离精子对冷冻处理的耐受性明显低于未分离精子。比较BO液和Percoll法处理法,结果表明,Percoll法处理后的精子体外受精后的卵裂率和囊胚率明显高于BO液处理法,但二者之间无显著差异(50.3%vs 45.3%;23.0%vs 19.1%,P＞0.05);利用不同种公牛的未分离精子(鲜精和冷冻)和分离精子(鲜精和冷冻)进行体外受精试验,试验结果表明不同类型精子(鲜精、未分离冷冻、分离鲜精、分离冷冻)进行体外受精,受精后的卵裂率存在显著差异(73.6%vs 63.9%vs 64.2%vs 45.7%,P＜0.05),但是囊胚发育率无显著差异(P＞0.05)。1号种公牛的囊胚发育率显著低于2号和3号种公牛(24.3%vs 29.7%vs 29.6%,P＜0.05)。分离精子和未分离精子牛体外受精囊胚的内胚团细胞数为29.5和35.8,分别占总细胞数的27.8%和32.8%无显著差异(P＞0.05)。由此推断,精子分离并没有影响体外受精后的胚胎发育,但在种公牛个体间存在显著差异。因此,利用分离精子体外生产性控胚胎是可行的,而选择适宜的种公牛,则对于提高体外生产高质量的性控胚胎都有着重要的意义。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分 研究论文
• 一、前言
• 二、材料与方法
• 1 材料与试验仪器
• 1.1 主要试验仪器
• 1.2 主要试剂
• 1.3 药品和基础液配制
• 2 实验方法
• 2.1 精子样品准备
• 2.2 分离效果和准确率的检测
• 2.3 精子活力的检测
• 2.4 体外受精
• 2.5 卵子成熟率、受精能力、胚胎发育及囊胚质量检测
• 2.6 统计
• 三、结果与分析
• 1 不同种公牛精子分离效果比较
• 2 分离和冷冻处理对牛精子活力的影响
• 3 不同种公牛分离和未分离冻精解冻后活力的比较
• 4 卵母细胞的成熟率
• 5 BO液和Percoll法处理效果比较
• 6 分离和未分离精子体外受精后的原核形成与受精效果的比较
• 7 分离和未分离精子受精后卵母细胞的卵裂与胚胎发育的比较
• 8 不同种公牛的不同类型精子受精后的卵裂与胚胎发育情况
• 9 分离和未分离精子体外受精囊胚的细胞数比较
• 四、讨论
• 1 分离和冷冻处理过程对精子活力的影响
• 2 不同受精处理方法对卵裂率及胚胎发育的影响
• 3 分离和冷冻处理的精子对受精及胚胎发育的影响
• 4 不同种公牛对受精和胚胎发育的影响
• 5 分离精子体外受精囊胚质量评价
• 五、结论
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表的学术论文
• 致谢
• 第二部分 文献综述
• 一、哺乳动物精子分离技术发展概况
• 二、流式细胞仪精子分离技术的发展概况
• 三、分离精子体外受精相关问题
• 四、牛囊胚细胞数测定
• 参考文献