EAPⅡ、ETS1在宫颈癌中的表达及其相互关系的研究

论文摘要

ETS 家族是一类转录因子,在组织的变异、淋巴组织的增生、侵袭和血管生成等方面发挥作用。ETS 发挥作用时与其联合蛋白（associated proteins）密切相关。本文研究了一种 ETS 家族成员—ETS1 及其联合蛋白 II（EAPII）相互作用促进宫颈癌转移的机制。 目的:通过在基因水平和蛋白水平上对 ETS1、EAPII 的研究,探讨各类宫颈病变中 ETS1、EAPII 的表达,特别是在宫颈癌的发生、进展中,两者的各自表达作用机制以及相关性。尝试阐明EAPII对ETS1转录活性的调控机制,为宫颈癌的诊断和治疗提供理论基础。 方法:本研究应用分子生物学的技术和方法,采用总 RNA 的提取,设计合成引物进行逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）,扩增两个研究片段:ETS1 和EAPII。结果证明,在不同宫颈的组织中:从 mRNA 水平来看,两者具有相互 抑制性表达。接着,我们应用蛋白质印迹法（Western-blotting）,分析蛋白水平上 ETS1 在不同宫颈组织中的表达量。最后,通过凝胶滞留电泳（EMSA）,应用探针标记技术,研究了蛋白、DNA 结合的相互作用,在转录水平进一步揭示了 EAPII 对 ETS1 结合 DNA 能力的调控作用。 结果:本课题对在不同分型宫颈组织中 ETS1 和 EAPII 的表达进行测定,RT-PCR 结果显示:随着向宫颈癌进展,ETS1 的表达量逐渐增加,p<0.05。且在淋转的宫颈癌中比未发生淋转的宫颈癌表达高,p<0.01。证明了 ETS1 与肿瘤浸润和转移有一定的关系。而 EAPIImRNA 的表达随宫颈癌进展呈逐渐降低,p<0.05。说明 EAPII 否定地调整了 ETS1 的转录活性。Western-blotting 结果显示与 mRNA 水平表达一致。EMSA 结果显示:随着向宫颈癌进展,ETS1结合 DNA 的 能力增强,而 EAPII 抑制其结合能力。可见 EAPII 是一个新的ETS1 调节者。它调节了 ETS1 功能的特殊方面,而它们之间的进一步作用尚需用其它实验方法进行验证。

论文目录

• 前言
• 第一部分 ETS1 及EAPII 因子在宫颈组织中的表达
• 第一章 ETS1 转录因子在mRNA 水平的研究
• Ⅰ-1.1 对ETS1 序列分析并设计相应引物
• Ⅰ-1.2 不同宫颈组织总RNA 抽提
• Ⅰ-1.3 甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测总RNA
• Ⅰ-1.4 RT-PCR 法扩增所需ETS1 基因序列
• Ⅰ-1.5 对不同宫颈组织中ETS1mRNA 表达产物进行分析讨论
• Ⅰ-1.6 小结
• 第二章 EAPII 因子在mRNA 水平上的研究
• Ⅰ-2.1 对EAPII 序列分析并设计相应引物
• Ⅰ-2.2 不同宫颈组织总RNA 抽提
• Ⅰ-2.3 PT-PCR 法扩增所需EAPII 基因序列
• Ⅰ-2.4 不同宫颈组织中mRNA 对EAPII 表达产物进行分析讨论
• Ⅰ-2.5 小结
• 第三章 ETS1 的蛋白表达及纯化
• Ⅰ-3.1 核蛋白的提取
• Ⅰ-3.2 表达蛋白的SDS-PAGE 分析
• Ⅰ-3.3 Western 印迹技术
• Ⅰ-3.4 蛋白水平上ETS1 的表达进行分析讨论
• Ⅰ-3.5 小结
• 第二部分 测定宫颈组织中ETS1、EAPII 结合活性
• Ⅱ-1 材料
• Ⅱ-1.1 组织
• Ⅱ-1.2 试剂及材料
• Ⅱ-2 方法
• Ⅱ-2.1 核蛋白提取
• Ⅱ-2.2 探针的标记和纯化
• Ⅱ-2.3 凝胶滞留电泳（EMSA）
• Ⅱ-3 结果
• Ⅱ-4 讨论
• Ⅱ-5 小结
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 个人简介
• 致谢