紫草素对JAR/MTX细胞毒性作用机制的蛋白质组学研究

论文摘要

恶性滋养细胞疾病的复发和耐药是当今妊娠滋养细胞肿瘤治疗的难题,迫切需要寻找新的化疗药物或是另辟新的治疗靶点。紫草素是我国传统中药,其对耐药的绒癌细胞作用少有报道,本研究首先以耐甲氨喋呤的绒毛膜癌JAR/MTX细胞为体外模型,采用细胞毒性实验、荧光染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡、坏死及对细胞周期的影响,探讨紫草素对其增殖抑制和促进其凋亡、坏死及阻滞细胞周期的作用。然后采用蛋白质组学技术初步探讨紫草素对耐药绒癌细胞的毒性作用机制。结果显示紫草素对JAR/MTX细胞具有明显的细胞毒性作用,其对绒癌耐药细胞生长的抑制率有明显的剂量和时间依赖性。Hoechst33342/PI双染显示细胞呈现亮蓝染色的核边集、核固缩、核碎裂等凋亡特征。流式细胞仪检测紫草素作用后,JAR/MTX细胞凋亡率及坏死率呈剂量及时间依赖性变化,随着药物浓度增加细胞周期G0/G1期比例升高,S期、G2/M期降低。这提示紫草素是通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡及坏死、阻滞细胞周期等多条途径发挥作用的。另外,本研究首次应用蛋白质组学技术探讨紫草素对JAR/MTX细胞毒性作用机制,建立了紫草素处理前后JAR/MTX细胞的双向凝胶电泳图谱。Q-TOF质谱初步鉴定了9个差异蛋白点:明显上调的蛋白质包括ROA2、GNS、uMtCK、ANXA2、VDAC2、PRS8、ETFB,明显下调的蛋白质包括CWC15、ezrin。本研究首次发现紫草素与埃兹蛋白、VDAC2、ANXA2等蛋白的联系,初步揭示了紫草素复杂的作用机理,提示这些变化的蛋白质可能与紫草素的毒性作用有关,也可能是紫草素的作用靶点,也为揭示其分子机制提供了大量新的线索。

论文目录

• 内容提要
• 英文缩略词索引表
• 第1篇 前言
• 第2篇 文献综述
• 第1章 紫草素及其衍生物抗肿瘤作用的研究概况
• 第2章 蛋白质组学在妇科肿瘤中的应用
• 第3篇 实验研究
• 第1章 紫草素诱导JAR/MTX 细胞凋亡及坏死
• 第1节 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 第2节 实验结果
• 1. 倒置相差显微镜下观察紫草素作用后 JAR/MTX 细胞的形态学变化
• 2. 紫草素作用JAR/MTX 的细胞毒性实验
• 3. Hoechst333422/PI 检测紫草素作用后 JAR/MTX 细胞的凋亡及坏死情况
• 4. 流式细胞仪检测紫草素作用后 JAR/MTX 细胞凋亡率及坏死率
• 5. 流式细胞仪检测紫草素对JAR/MTX 细胞周期的影响
• 第3节 讨论
• 第4节 结论
• 第2章 紫草素诱导JAR/MTX 细胞损伤的蛋白质组学研究
• 第1节 材料与方法
• 1. 材料
• 2 实验方法
• 第2节 实验结果
• 1. 双向凝胶电泳图谱的建立
• 2. Q-TOF 质谱鉴定差异蛋白点结果
• 3. Western-blot 验证差异蛋白点
• 第3节 讨论
• 第4节 结论
• 第4篇 全文主要创新点
• 参考文献
• 攻读博士期间发表的论文
• 致谢
• 中文摘要
• Abstract