发酵轮叶党参抗肝癌活性部位研究

论文摘要

目的：近年来,随着肝癌的发病率不断的增长,预防肝癌日益引起了人们的关注。轮叶党参（Codonopsis lanceolata）属桔梗科党参属多年生草本植物。地下根部为药食两用植物,含有皂苷、黄酮、多酚、多糖、多种维生素和矿物质等。据文献报道,轮叶党参乙醇提取物具有预防酒精性肝损伤的作用、抗氧化及抗突变作用、抗肿瘤作用,但尚未见到发酵轮叶党参对肝癌的抑制作用。本实验拟通过对轮叶党参发酵菌种筛选、发酵轮叶党参的最佳条件优化、发酵轮叶党参提取物抑制肝癌有效部位研究,为开发肝癌化学预防制剂提供理论依据。方法：（1）利用比色法与紫外分光光度法,对酵母菌、乳酸菌、EM菌发酵的轮叶党参提取物中齐墩果酸、总皂苷、总黄酮含量测定与未发酵轮叶党参提取物的比较。（2）轮叶党参对移植性小鼠H22肝癌抑制作用：取小鼠80只,随机分组为8个组,分别灌胃发酵与未发酵轮叶党参乙醇提取液220、110、55mg/kg,空白对照组（灌胃蒸馏水1OmL/kg）,环磷酰胺组（每日腹腔注射环磷酰胺25mg/kg体重）,连续10d,处死,取出肿瘤、脾脏、胸腺,称重。（3）发酵轮叶党参抗肝癌有效部位筛选：采用MTT法研究,发酵轮叶党参乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等3个部位,终浓度分别为125、250、500μg/mL时,观察对体外小鼠H22肝癌细胞增殖抑制作用。（4）利用正交设计方法,对酵母用量、发酵时间、葡萄糖用量、发酵温度等条件进行优化。（5）轮叶党参发酵前后的乙醇提取物正丁醇部位抑制肝癌细胞增值作用的比较：采用MTT法比较发酵与未发酵轮叶党参乙醇提取物的正丁醇部位对小鼠H22肝癌细胞与HepG2人肝癌细胞体外增殖抑制作用。结果：（1）用酵母菌发酵轮叶党参后,齐墩果酸、总皂苷含量最高；发酵轮叶党参乙醇提取物中总皂苷和齐墩果酸含量明显高于未发酵轮叶党参乙醇提取物（P<0.05）,总皂苷的含量是未发酵轮叶党参乙醇提取物的2.1倍。（2）发酵轮叶党参乙醇提取物中、高剂量组肿瘤重量明显低于模型组（P<0.01）,中剂量组抑制率超过50%。未发酵轮叶党参乙醇提取物低剂量组和中剂量组的肿瘤重量明显低于模型组（P<0.05）,中剂量组抑制率超过30%,但三个剂量组的抑制率均未超过50%。发酵与未发酵轮叶党参乙醇提取物的脾脏指数、胸腺指数均显著高于环磷酰胺组（P<0.05或P<0.01）,与模型组比较,无显著差异。（3）发酵轮叶党参乙醇提取物石油醚部位500μg/mL、乙酸乙酯部位250μg/mL和500μg/mL、正丁醇部位250μg/mL和500μg/mL的肝癌细胞增殖抑制率均明显高于溶剂对照组,其差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。其中正丁醇部位250μg/mL和400μg/mL剂量组的抑制率最高（P<0.01）。（4）轮叶党参酵母菌发酵条件优化结果,活性酵母用量为1%、葡萄糖用量为5%、发酵时间24h时,对H22细胞增殖抑制能力最强（P<0.01）。（5）发酵轮叶党参乙醇提取物400μg/mL（?）（?）600μg/mL组,对H22肝癌细胞体外增殖抑制作用均显著高于CL相应剂量组（P<0.01）;400μg/mL组对HepG2人肝癌细胞的体外抑制作用均显著高于CL相应剂量组（P<0.01）。结论1.酵母菌发酵轮叶党参提高总皂苷含量的效果最佳。2.发酵轮叶党参抗肝癌作用优于未发酵轮叶党参。3.发酵轮叶党参正丁醇部位抗肝癌作用最强。4.发酵轮叶党参的最佳条件为酵母量为0.5%-5.0%,葡萄糖量为1%-8%,发酵时间为1-10天。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 第二章 材料与方法
• 2.1 仪器与试剂
• 2.2 实验动物
• 2.3 细胞株
• 2.4 生药材来源及处理
• 2.5 轮叶党参发酵前后齐墩果酸、总皂苷及黄酮类含量测定
• 22肝癌荷瘤小鼠抑癌作用实验'>2.6 H₂₂肝癌荷瘤小鼠抑癌作用实验
• 2.7 发酵轮叶党参有效部位分离
• 2.8 发酵轮叶党参抑癌作用有效部位筛选
• 2.9 轮叶党参发酵最佳条件研究
• 2.10 发酵前后轮叶党参正丁醇部位抑癌活性比较
• 2.11 数据统计处理
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 发酵前后轮叶党参中化学成分含量变化
• 22荷瘤小鼠抑制作用'>3.2 轮叶党参乙醇提取物对H₂₂荷瘤小鼠抑制作用
• 3.3 发酵轮叶党参有效部位筛选
• 3.4 轮叶党参发酵最佳条件研究
• 3.5 发酵与未发酵轮叶党参正丁醇部位细胞毒性比较
• 第四章 讨论
• 4.1 菌种筛选与确定
• 4.2 轮叶党参发酵前后皂苷含量变化
• 4.3 发酵轮叶党参抑制肝癌细胞生长作用
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致謝
• 综述
• 参考文献