论文摘要
目的:有关幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori,H.pylori）感染与PTEN/PI3K/Akt信号途径在胃粘膜相关疾病发生发展中的关系目前尚未见报道。本研究拟用H.pylori培养上清液作用胃上皮细胞,观察H.pylori对胃上皮细胞PTEN/PI3K/Akt信号途径的影响,探讨H.pylori是否通过该信号途径诱导胃粘膜上皮的细胞凋亡和细胞周期的变化,引起胃粘膜上皮的损伤,而导致胃部疾病的发生,从而为H.pylori相关疾病的防治提供新思路。方法:1.根据预实验四唑盐（MTT）比色法结果,我们分组如下:GES-1细胞随机分为:实验组（A、B、C组）给予H.pylori培养上清液作用,浓度分别为0.6、0.3、0.15mg/ml;阴性对照组（D组）和空白对照组（E组）,分别给予H.pylori培养液和DMEM液处理。2. MTT比色法用于检测GES-1细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;RT-PCR检测PTEN mRNA;免疫细胞化学检测PTEN蛋白的表达;Western Blot检测磷酸化Akt的表达。结果:1. H.pylori培养上清液能以时间和浓度依赖的方式抑制GES-1细胞生长。24h后,A组GES-1细胞存活率显著低于B、C、D组（P<0.01）,且后三组间无显著差异（P>0.05）;48h和72小时后,A组和B组的GES-1细胞存活率显著低于C和D组（P<0.05～P<0.01）,且A组显著低于B组（P<0.05～P<0.01）,而C组存活率无显著变化（P>0.05）;同时,A组GES-1细胞存活率在24h,48h和72h间均具有显著差异（P<0.05～P<0.01）。2. H.pylori培养上清液能以时间和浓度依赖的方式诱导GES-1细胞凋亡。24h后,A组GES-1细胞凋亡与D组无显著差异（P>0.05）;48h后,A、B组GES-1细胞凋亡显著高于C、D组（P<0.01）,且A组显著高于B组（P<0.01）,而C、D组间无显著差异（P>0.05）;同时,A组GES-1细胞凋亡在48h显著高于24h（P<0.01）。3. H.pylori培养上清液能以时间和浓度依赖的方式诱导GES-1细胞G0-G1期阻滞。24h后,A组GES-1细胞G0-G1期比例显著高于D组（P<0.01）;48h后,A和B组G0-G1期GES-1细胞比例显著高于C、D组（P<0.01）,且A组显著高于B组（P<0.05）,而C和D组间无显著差异（P>0.05）;同时,A组GES-1细胞G0-G1期比例在48h显著高于24h（P<0.05）。4. H.pylori培养上清液诱导PTEN mRNA表达。H.pylori培养上清液作用48h后,A组GES-1细胞PTEN mRNA表达显著高于D组（P<0.01）。5. H.pylori上清液能以时间和浓度依赖的方式诱导PTEN蛋白表达。24h后,A组PTEN蛋白表达显著高于D组（P<0.01）;48h后,A和B组PTEN蛋白表达显著高于C、D组（P<0.01）,且A组显著高于B组（P<0.01）,而C和D组间无显著差异（P>0.05）;同时,A组GES-1细胞PTEN蛋白表达在48h显著高于24h（P<0.05）。6. H.pylori上清液能以时间和浓度依赖的方式诱导磷酸化Akt表达下降。24h后,A组磷酸化Akt表达显著低于D组（P<0.01）;48h后,A和B组磷酸化Akt表达显著低于C、D组（P<0.01）,且A组显著低于B组（P<0.05）,而C和D组间无显著差异（P>0.05）;同时,A组GES-1细胞磷酸化Akt表达在48h显著低于24h（P<0.01）。7. G0-G1期GES-1细胞比例,细胞凋亡和存活率间,PTEN蛋白和磷酸化Akt表达间存在负相关。H.pylori培养上清液作用GES-1细胞48h后,各组细胞周期G0-G1期GES-1细胞比例,细胞凋亡和存活率间存在负相关（r=-0.779-0.874,P<0.01）。另外,PTEN蛋白和磷酸化Akt表达间存在负相关（r=-0.931,P<0.01）。结论:1. H.pylori培养上清液能以时间和浓度依赖的方式诱导细胞凋亡及细胞周期G0-G1期阻滞,从而抑制胃粘膜上皮细胞GES-1生长。2. H.pylori培养上清液可上调PTEN mRNA表达,并以时间和浓度依赖的方式上调PTEN蛋白表达和抑制Akt的磷酸化。3. H.pylori培养上清液可能通过影响PTEN/ PI3K /Akt信号途径诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,这可能是其损伤胃黏膜,进而引起H.pylori相关疾病的机制之一。
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