口蹄疫的RT-PCR检测及免疫抗体监测

论文题目: 口蹄疫的RT-PCR检测及免疫抗体监测

论文类型: 硕士论文

论文专业: 预防兽医学

作者: 何晓辉

导师: 张以芳,伏小平,李金福

关键词: 口蹄疫,试验,正向间接血凝试验,抗体监测

文献来源: 甘肃农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdisease virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性高度接触性传染性疫病,被国际兽疫局列为A类动物传染病之首。通过交叉保护试验和血清学试验确定FMDV有7个血清型,即O、A、C、AsiaⅠ和SAT1、SAT2、SAT3,及65个以上的血清亚型,血清型之间无交叉和交叉免疫现象。O、A、C型FMDV的毒力和抗原性均易发生变异,几乎遍布亚、非、拉、欧各洲;SAT1、SAT2、SAT3主要分布在非洲,AsiaⅠ型主要分布在亚洲,及中国的云南、新疆等。由于口蹄疫(FMD)是世界范围内危害最严重的烈性传染病,并且口蹄疫血清型多,变异株多,分部广,传播速度快,要求防制体系具有快速正确的反应能力,疫情监测系统是决定反应快慢及正确与否的关键,而诊断方法是监测系统的技术依托,准确可靠的诊断结果是制定正确防制措施的依据。本研究对昆明地区O型FMDV流行状况进行了调查,结合昆明地区口蹄疫诊断检测及防治过程中存在的主要问题,参考已发表的口蹄疫有关序列,有针对性地设计了口蹄疫群特异性引物和型特异性引物,并与OIE指定的口蹄疫AC-ELISA检测方法进行了比较。对标准毒株、野毒株及临床中疑似口蹄疫病料进行RT-PCR检测,结果证明:群特异性引物P2B1/P282对O型和Asia-Ⅰ型标准毒株和野毒株都能扩增出特异的目的基因片段;型特异性引物P1D1/P2B1、P1D2/P281可对这两型的病毒进行快速分型,结果与AC-ELISA检测结果相符,以此构建的口蹄疫RT-PCR技术是口蹄疫的一种快速、准确、灵敏、特异地检测方法。根据诊断结果,对口蹄疫疫区的动物用不同厂家疫苗进行免疫,并用正向间接血凝进行抗体监测,监测结果表明:各个厂家不同批次的疫苗免疫后,抗体水平差异不显著;而在不同动物之间的抗体水平比较发现,牛高于羊、羊高于猪。免疫后60天后,抗体水平开始下降,说明目前使用的口蹄免疫苗免疫保护期短,二次免疫的抗体水平好于一次免疫的,浓缩苗优于普通苗;猪口蹄疫灭活苗与猪瘟猪肺疫二联同时使用,不影响口蹄疫免疫效果。此结果为口蹄疫的免疫程序制定提供了重要依据。

论文目录:

摘要

Summary

第一部分 文献综述 口蹄疫的流行及其诊断技术的研究进展

一 FMD病原、流行病学

1.病原

1.1 FMDV基因组结构及其功能

2 流行病学

2.1 云南省口蹄疫流行概况

2.1.1 口蹄疫流行的历史

2.1.2 流行区域

2.1.3 传染来源

2.1.4 流行病毒血清型

2.1.5 流行病学特征

2.1.6 近年口蹄疫流行的流行病学

二 FMD的诊断技术应用及进展

1 血清学诊断技术

1.1 琼脂扩散试验

1.2 补体结合试验(CFT)

1.3 病毒中和试验(VNT)

1.4 酶联免疫吸附试验(ELISA)

1.4.1 间接夹心ELISA

1.4.2 液相阻断夹心ELISA

2 生物学试验

3 分子生物学诊断技术

3.1 核酸探针

3.2 聚合酶链反应(PCR)

3.3 电聚焦

3.4 核酸序列分析

3.5 寡核苷酸指纹图谱分析

3.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(PAGE)

3.7 单克隆抗体技术(McAb)

第二部分 研究内容 口蹄疫的RT—PCR检测及免疫抗体监测

1.材料和方法

1.1 样品来源

1.2 毒株及灭活疫苗

1.3 主要试剂,生物试剂

1.4 主要仪器

1.5 ELISA检测

1.6 RT-PCR检测技术建立

1.6.1 引物设计及合成

1.6.2 病毒总RNA提取

1.6.3 RT-PCR扩增

1.6.4 RT-PCR产物检测

1.6.5 RT-PCR检测技术应用

1.7 免疫抗体监测

1.7.1 抗体监测方法及技术

1.7.2 监测技术应用

2.实验结果

2.1 ELISA检测结果

2.2 RT-PCR检测结果

2.2.1 病毒总RNA提取结果

2.2.2 RT—PCR技术建立结果

2.2.3 RT-PCR检测样品结果

2.2.4 RT-PCR方法与ELISA鉴定结果比较

2.3 抗体监测实验结果

2.3.1 猪口蹄疫免疫抗体监测结果(实验组)

2.3.2 牛、羊口蹄疫免疫抗体监测结果

2.3.3 昆明市各县(市、区)猪免疫抗体监测结果

2.3.4 昆明市各县(市、区)牛免疫抗体监测结果

2.3.5 昆明市各县(市、区)羊疫抗体监测结果

2.3.6 免疫抗体监测统计分析结果

3.讨论

4.结论

致谢

参考文献

作者简介

导师简介

发布时间: 2008-08-11

参考文献

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