论文摘要
白癜风是皮肤科常见的以表皮黑素细胞破坏为特征的皮肤色素脱失性疾病。其发病机制尚不清楚,不同学者就其病因及发病机理提出多种学说,如自身免疫学说、神经学说、黑素细胞自毁学说、遗传学说、黑素细胞生长因子缺乏学说等。但任何单一学说均不能完全解释白癜风的发病机理。有学者认为多因素、多基因累积共同导致了白癜风的发生,不同的个体可能存在不同病因的组合,其中遗传基因的易感性在其中占据了重要的地位。近年来白癜风细胞免疫现象受到高度关注。Fas（APO-1/CD95）,属TNF受体家族,Fas与其配体（FasL）结合可以启动Caspase的级联反应,导致细胞凋亡。Caspase家族是一组结构特征相似的半胱氨酸蛋白酶,是凋亡的中心调节者,可分为ICE亚族和CED-3家族,前者参与炎症反应,后者参与细胞凋亡,又分为两类:一类为执行者,如Caspase-3、6、7,它们可直接降解胞内的结构蛋白和功能蛋白,引起凋亡,但不能通过自催化或自剪接的方式激活;另一类为启动者,如Caspase-8、9、10,受到信号后,能通过自剪接而激活,然后引起Caspase级联反应。Fas基因和Caspase基因功能性单核苷酸多态性（SNP）位点会改变转录活性,进而影响表达水平。白癜风、Fas凋亡通路和免疫三者之间关系密切。白癜风的发病与T淋巴细胞所致的黑素细胞破坏密切相关。Fas凋亡通路参与了外周淋巴器官中T细胞的清除。白癜风患者皮损、PBLC上和循环中有Fas/FasL及sFas/sFasL的异常表达。sFas通过膜结合受体的蛋白裂解或由mRNA选择性剪接而产生。有报道显示白癜风患者血清中sFas水平较正常人明显增高。先前研究还显示:阻断Fas和FasL的相互作用可以在类似于白癜风的转基因小鼠模型上部分抑制T细胞介导的黑素细胞的破坏。目前还没有关于Fas/FasL基因多态性与白癜风相关性的研究,从基因水平探索Fas凋亡通路与白癜风发病的相关性,可以从遗传学和免疫学角度阐明和完善白癜风发病机制,为白癜风的防治提供新思路和理论依据,并为其他多基因疾病,尤其是与免疫密切相关的多基因疾病的研究奠定基础。聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术是一种检测基因多态性的方法。不同个体基因的限制性内切酶的酶切位点碱基不同导致基因的序列发生变化,这种变化可以通过特定探针杂交进行检测,从而可比较不同个体的基因多态性。目的:分析Fas凋亡通路Fas和Caspase基因单核苷酸多态性与中国汉族人群白癜风发病的相关性,以及相关的功能学初步研究,探讨白癜风的遗传学背景及发病机制,为白癜风的诊断和预后提供新的指标。方法:应用病例-对照研究方法,在中国汉族人群中选取无血缘关系的白癜风患者和性别、年龄与之相配比的正常人群作为研究对象,收集外周血,提取基因组DNA,应用PCR-RFLP技术,探索了Fas凋亡通路中Fas、FasL和Caspase基因启动子区多态性位点与白癜风易感性的关系,并采用ELISA法检测了血清sFas水平。结果:1.白癜风患者Fas-1377G>A位点基因型频率在患者组中和正常对照组间有统计学差异（P=0.015）,在Fas-670A>G位点未发现有统计学意义结果,提示在中国汉族人群中Fas-1377基因多态性与白癜风发病易感性具有相关性。2. Fas-1377和Fas-670位点存在连锁不平衡现象（D′=0.784,P<0.001）,Fas–AA单体型在两组间有显著差异（分别为6.5%和2.4%,P<0.001）,且与白癜风发病危险性相关（校正OR值3.29,95%可信区间2.05–5.29）。3.具有Fas–1377（AG+AA）/–670（AG+AA）合并基因型的个体发病危险性较高（校正OR值1.44,95%可信区间1.15–1.79）。4.包含3–4个危险等位基因的个体白癜风发病危险性较高（校正OR值2.87,95%可信区间1.90–4.32）。5.女性（校正OR值1.53,95%可信区间1.12–2.10）、非节段型白癜风（校正OR值1.32,95%可信区间1.07–1.62）、发病年龄≤20岁（校正OR值1.36,95%可信区间1.05–1.77）和无家族史（校正OR值1.33,95%可信区间1.07–1.65）的白癜风患者发病危险性较高。6.患者组血清sFa（s2.03±1.23ng/ml）明显高于对照组（1.26±0.66ng/ml）（P<0.05）,但是不随Fas-1377基因型别而改变。7. CASP8-652和CASP10 I522L两位点呈高度连锁不平衡（D’=0.934,P<0.001）,但是在患者组和对照组间未发现任何有统计学意义的差异。结论:本研究首次研究和探索了Fas凋亡通路SNP与白癜风易感性的关系,发现Fas-1377位点与白癜风易感性相关,并在此基础上合理地提出“处于Fas启动子区的SNPs可能通过影响该基因的转录调控,影响细胞免疫功能,并进而导致黑素细胞损伤,增加白癜风的发病危险性”这一全新的假说,对揭示Fas凋亡通路功能性SNPs在白癜风发生过程中的可能机制具有重要的理论意义,也为今后在人群中开展白癜风遗传易感性研究,寻找易感性生物标志物用于白癜风的预防和治疗提供参考依据。