重组人核糖核酸酶抑制因子对大鼠白内障的防治作用研究

论文摘要

人核糖核酸酶抑制因子（human ribonuclease inhibitor, hRI）是一种酸性蛋白质（pI= 4.7）,广泛存在于哺乳动物细胞浆中,分子量约为50kD,其基因定位于染色体11p15.5。RI是核糖核酸酶A（ribonuclease A, RNase A）的抑制剂,可以有效地抑制其对RNA的水解活性。RI的三维结构的特征是由交替出现的α螺旋和β片层构成的马蹄形结构。RI的重复结构单元是富含亮氨酸残基的序列,这些富含亮氨酸残基的重复序列（Leucine-rich repeats, LRRs）出现在一个大的蛋白家族,该蛋白家族的显著特征是具有巨大的表面区域用于蛋白质与蛋白质间的相互作用。RI的这种独特结构和功能使其成为研究LRRs的核心蛋白。hRI含有32个高度保守的半胱氨酸残基,其中至少有30个半胱氨酸的巯基以还原形式存在,还原型巯基是保持RI正常生物学活性所必需的。生物体内的还原型谷胱甘肽（GSH）通过其巯基对抗氧化剂,提示RI可能具有一定的抗氧化能力。糖尿病性白内障发病的机理是由于单糖氧化时产生大量的氧自由基,氧自由基可损伤晶状体蛋白和晶状体上皮细胞膜,导致蛋白变性和细胞受损而引起白内障的发生发展。本研究室的前期研究已表明RI能对抗H2O2对大鼠神经胶质瘤C6细胞的氧化损伤。本实验采用腹腔注射链脲佐菌素的方法建立了Wistar大鼠糖尿病性白内障模型;采用本室构建的pGEX-6p-1-hri融合型表达质粒转化大肠杆菌Rosetta,表达重组的GST-hRI;经培养和收集细菌、超声破碎菌体、收集离心后的上清,再经Glutathione-Sepharose 4B亲和层析分离纯化获得重组hRI。观察重组hRI对链脲佐菌素糖尿病性大鼠白内障的治疗作用。结果表明,重组hRI可明显减缓大鼠白内障的发展进程。通过检测大鼠晶状体的各种生化指标表明,GST-hRI高剂量组GSH含量及SOD活性与正常组没有统计学差别（p>0.05）,明显高于其它组,其MDA含量则低于其它各治疗组,但高于正常组,而其GSH-PX活性与其它各组无明显差异（p>0.05）。通过检测各组动物房水中GSH含量及SOD的活性,与晶状体中对应的生化指标检测结果相一致。推测GST-hRI能对抗氧化剂,从而减少了晶状体内的氧化应激压力,避免了晶状体内各种抗氧化酶类构成的抵御氧化应激屏障的启动。结论:1.成功的应用链脲佐菌素制备了大鼠白内障模型。2.融合蛋白GST-RI能明显延缓糖尿病性白内障的发生、发展,对链脲佐菌素性白内障有一定的防治作用,且疗效与剂量成正相关,其疗效优于白内停。3.为重组hRI的进一步应用提供了实验依据,重组hRI有可能成为防治白内障的新药。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料
• （五） 方法
• （六） 结果
• （七） 讨论
• （八） 结论
• （九） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢