论文摘要
目的考察腺病毒载体搭载的人TIMP-3（RAdTIMP-3）对兔椎间盘内重要基质代谢的影响,及其是否对椎间盘细胞有诱导凋亡作用。方法①培养293细胞并分别转染重组腺病毒RAdLac-Z和RAdTIMP-3,病毒转染后分别进行扩增,分离,纯化及进行病毒滴度测定。采用PCR方法对纯化后病毒进行鉴定并保存病毒液备用。②将30只健康日本大白兔,随机分成5组,每组6只,分别对兔L4-L5、L5-L6椎间盘内注射生理盐水（第1组）、RAdLac-Z（第2组）、RAdTIMP-3（第3、4、5组）各25μl。第1、2组为对照组,第3、4、5组为干预组,按实验预定时间处死动物,获取椎间盘组织。③Tunel法检测椎间盘细胞凋亡情况,以及藏红O-快绿染色考察aggrecan的含量及分布情况;采用RT-PCR方法,对各组椎间盘组织内TIMP-3、聚集蛋白聚糖（aggrecan）以及II型胶原的表达量进行检测。结果①RAdLac-Z及RAdTIMP-3病毒能够转染293细胞,并扩增,β-半乳糖苷酶原位染色显示阳性;病毒经纯化后滴度可达2.02×1012VP。②椎间盘组织Tunel法染色显示,各组凋亡细胞比例为12.6%、12.9%、13.5%,12.8%和13.2%,治疗组与对照组无明显差异。③臧红O-快绿染色显示干预组椎间盘显色强度明显高于对照组。④RT-PCR显示,注射目的基因的干预组TIMP-3、aggrecan及II型胶原的表达均增加,注射四周后盘内依然可见TIMP-3及aggrecan的高表达,且明显高于对照组。结论RAdTIMP-3介导的TIMP-3基因能够在兔椎间盘内表达,提高椎间盘内TIMP-3、aggrecan及Ⅱ型胶原的表达,改善椎间盘基质成分的质和量,且无明显诱导椎间盘细胞凋亡现象。TIMP-3基因具有治疗椎间盘退变的潜力。
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