论文摘要
组织因子途径抑制物-2（tissue factor pathway inhibitor-2, TFPI-2）是最近发现的一种丝氨酸蛋白酶抑制剂。体外实验发现,TFPI-2可抑制纤溶酶、胰蛋白酶基质、基质金属蛋白酶-1 （matrix metalloproteinase-1, MMP-1）、基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-1, MMP-3）、因子Ⅶa和组织因子复合物（FⅦa-TF）等多种蛋白酶,在维持细胞基质重塑及血管生成、调控肿瘤细胞侵袭转移、调节血液凝固及细胞凋亡等方面可能具有重要作用。本研究从人新鲜肝组织总RNA中钓取tfpi-2 cDNA序列,利用基因重组技术,构建tfpi-2 cDNA克隆载体pMD18-T-tfpi-2及tfpi-2表达载体pPICZα-tfpi-2。将tfpi-2表达载体转化毕赤酵母X-33,建立兼具原核系统良好操作性和真核系统后加工性的重组TFPI-2毕赤酵母真核表达体系。通过菌液PCR鉴定、SDS-PAGE和重组TFPI-2蛋白活性的筛选,筛选出高表达重组TFPI-2蛋白的酵母菌。将该转化子表达出的蛋白进行活性测定。结果表明,本研究正确克隆了tfpi-2 cDNA序列,构建的重组TFPI-2毕赤酵母真核表达体系经甲醇诱导可分泌具有胰蛋白酶抑制活性的重组TFPI-2蛋白,相对分子量为32kDa。TFPI-2的分泌表达在诱导第5天达峰值,为41750 TIU/L。国内外文献未见相关报道。本研究为基因工程方法生产TFPI-2药物提供了实验依据。
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标签：组织因子途径抑制物论文; 克隆论文; 表达论文; 毕赤酵母论文;