论文摘要
第一部分 胰岛素受体底物-1在MC3T3-E1细胞分化过程中的表达及雌激素对其的影响 目的：观察胰岛素受体底物-1在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化过程中的表达以及17 β-雌二醇对其的影响。 方法：应用10mM β-甘油磷酸钠和50μg／ml抗坏血酸诱导小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化成熟，分别在0、6、12、18、24和30天收集细胞。用α-磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶活性；放射免疫法测定骨钙素含量；半定量RT-PCR检测胰岛素受体底物-1（IRS-1）、Ⅰ型胶原、骨涎蛋白和骨桥素的mRNA表达；免疫印迹法检测MC3T3-E1细胞分化过程中不同时间点IRS-1蛋白的表达；用茜素红染色观察矿化结节形成。并予17β-雌二醇干预，用半定量RT-PCR和免疫印迹法检测干预组和对照组细胞IRS-1 mRNA和蛋白的表达，比较两组细胞IRS-1表达量的变化。 结果：在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化成熟过程中，Ⅰ型胶原在MC3T3-E1细胞培养早期即有表达（0.32±0.02），其表达量随细胞的成熟而逐渐增高，6天达高峰（0.65±0.13），之后略有下降（0.44±0.03）。碱性磷酸酶活性迅速上升，18天达高峰（28.93±3.31U／L），之后逐渐下降（10.58±1.23 U／L）。骨钙素含量随培养时间延长而逐渐增
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