高强度聚焦超声制备肿瘤抗原致敏DC及其体外诱导T细胞产生IFN-γ的研究

论文题目: 高强度聚焦超声制备肿瘤抗原致敏DC及其体外诱导T细胞产生IFN-γ的研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 老年医学

作者: 邹玉红

导师: 叶欣

关键词: 树突状细胞,高强度聚焦超声,剂量,肿瘤抗原,负载,细胞因子,干扰素,肿瘤疫苗

文献来源: 泰山医学院

发表年度: 2005

论文摘要: 目的：建立体外大量扩增小鼠树突状细胞(dendritic cell, DC)的方法；探讨用高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound, HIFU)辐照肿瘤细胞制备肿瘤抗原致敏DC和制备DC肿瘤疫苗的可行性,为HIFU开辟新的应用领域。方法：①应用1ng/ml IL-4和lOng/ml GM-CSF联合诱导培养小鼠骨髓细胞,光镜及电子显微镜观察DC发育过程中形态学变化；流式细胞术检测DC表面分子CD80、CD86、H-2Kd及I-Ad的表达情况；②固定辐照时间,应用不同功率的HIFU辐照CT26细胞株后,用台盼兰染色、MTT法测定活肿瘤细胞数,同时用台盼兰染色观察肿瘤细胞的形态学变化,分析HIFU剂量与肿瘤细胞存活率的关系,了解剂量-效应关系；③固定辐照时间和超声强度,辐照CT26细胞悬液,制备肿瘤细胞抗原并致敏DC,致敏DC与T细胞功孵育48小时后提取上清,通过ELISA法检测上清中IL-12、IFN-γ的含量,并与冻融组、单纯CT26、对照组进行比较。结果：①用IL-4和GM-CSF联合培养小鼠骨髓细胞3天后,可见细胞形态发生改变,细胞形态不规则。培养第6～8天,细胞表面出现较多毛刺样突起,拉长,为典型的DC特征。流式细胞仪检测DC表面分子有CD80、CD86、H-2Kd及I-Ad表达；②随着HIFU辐照剂量的增加肿瘤细胞的存活率迅速减少,肿瘤细胞的碎片逐渐增多。超声剂量为1000W/cm2×30秒时,无细胞存活,肿瘤细胞完全失去细胞形态,全部被撕裂成碎片;③通过ELISA法检测HIFU、冻融、单纯CT26三组上清中IL-12、IFN-γ的含量显著高于对照组(p均<0.05),HIFU、冻融两组上清中IL-12、IFN-γ的含量显著高于单纯CT26组(p均<0.05),但H1FU、冻融组之间比较在统计学上无显著性意义(p>0.05)。结论：应用IL-4联合GM-CSF培养小鼠骨髓细胞,可大量扩增成熟DC,培养的DC符合其自身的特性;HIFU能灭活肿瘤细胞且能破碎肿瘤细胞,HIFU制备的肿瘤抗原可体外致敏DC,并可使DC成熟分泌大量IL-12,同时能诱导T细胞分泌大量IFN-γ。

论文目录:

摘要

ABSTRACT

符号说明

第一部分 小鼠骨髓树突状细胞诱导及鉴定

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分 高强度聚焦超声制备肿瘤抗原的剂量学研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

附图表

参考文献

综述

参考文献

致谢

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发布时间: 2011-04-22

参考文献

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