附子资源色谱指纹图谱及道地性的初步研究

论文摘要

附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品,具有回阳救逆、补火助阳、逐风寒湿邪等作用。其主要有效成分为剧毒的双酯二萜类生物碱,如乌头碱（aconitine,Ac）、中乌头碱（mesaconitine,MA）与次乌头碱（hypaconitine,HA）,使用前需炮制,降低毒性。附子广泛分布于陕西及四川、云南等长江中下游地区,其传统道地产区是四川江油。1、附子药材色谱指纹图谱的初步研究目的:采用作者探索的高效液相色谱法（HPLC）,建立生附子药材的色谱指纹图谱,鉴定待测药材,为附子品种改良提供材料。方法:kromasil C18色谱柱,流动相:A水(内含6mmol·L-1SDS、20mmol·L-1NaH2PO4)-B甲醇,梯度洗脱条件:0-10min,A-B（65:35）;24-70min,A-B（33:67）;流速0.8ml·mim-1,检测波长240nm。结果:各批药材色谱峰分离良好,符合指纹图谱技术有关规定,14批生附子药材最终确定9个共有峰是附子特征指纹峰;共有峰中,6个峰是附子主要成分,入选n强峰;与附子GAP生产基地的药材比较,相似度0.90以上的共有7批附子药材样品。结论:本研究建立的方法能够准确的分析出不同来源附子药材的成分以及其含量。从化学成分方面,作为生附子药材鉴定和质量控制的参考依据,本实验最终筛选出1、2、3、4、6、12、13号样品作为附子GAP基地使用材料。2、不同产地附子次乌头碱含量及道地性的初步研究目的:通过作者自己在三地栽培附子,并对生长期进行监控,采用这种全新的道地性实时研究模式,探讨附子产量形成、有效成分积累与降雨、光照、土壤等生态因素的直接关系,研究附子道地性形成机理。方法:2006年12月,将同种来源的附子栽种在江油（道地产区）、成都、雅安三地,2007年7月采收时分析不同产地附子的株高、产量等数据,采用HPLC法测定不同产地生附子中次乌头碱含量,综合2006年12月---2007年7月气候、土壤等因素,分析附子道地性的机理。结果:江油、成都、雅安附子块根次乌头碱含量分别为1.099 mg·g-1、1.087 mg·g-1和0.755 mg·g-1;产量分别为435.472kg·667m2 -1、393.714 kg·667m2 -1和321.429kg·667m2 -1。结论:气候、土壤是影响附子道地性的主要因素,道地产区江油的生态因素更适宜附子生产以及有效成分的积累。

论文目录

• 第一部分
• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 1 文献综述
• 1.1 分布与栽培历史
• 1.2 生物学
• 1.3 化学成分
• 1.4 药理药效
• 1.4.1 附子对心血系统作用
• 1.4.2 附子的抗炎作用及其对内分泌的影响
• 1.4.3 对镇痛、镇静和体温的影响
• 1.4.4 对免疫系统的作用
• 1.5 品种资源
• 1.6 国内外栽培研究
• 1.7 现代化与中药研究
• 2 道地性研究
• 2.1 道地性历史来源和定义
• 2.2 道地性研究方法
• 2.2.1 本草考证方面的研究
• 2.2.2 种子资源
• 2.2.3 药材性状、有效成分及药效方面的研究道地药材性状的研究
• 2.2.4 生态环境方面的研究
• 2.2.5 遗传基因方面研究
• 2.2.6 栽培技术的研究
• 2.2.7 采收与产地加工技术研究
• 3 指纹图谱技术
• 3.1 指纹图谱技术，中药融入世界的钥匙
• 3.2 指纹图谱的定义
• 3.3 指纹图谱技术应用
• 3.3.1 国际指纹图谱技术应用
• 3.3.2 国内指纹图谱技术应用
• 3.4 色谱指纹图谱技术
• 3.4.1 化学成分指纹图谱技术的发展
• 3.4.1.1 薄层层析色谱（TLC）指纹图谱
• 3.4.1.2 气相色谱（GC）指纹图谱
• 3.4.1.3 紫外光谱（UV）、核磁共振光谱（NMR）和红外光谱（IR）
• 3.4.1.4 高效毛细管电泳（HPCE）指纹图谱
• 3.4.1.5 高效液相（HPLC）色谱指纹图谱
• 3.4.2 色谱指纹图谱技术研究方法
• 3.4.2.1 方法学考察
• 3.4.2.2 标准样品指纹图谱的建立
• 3.4.3 色谱指纹图谱涉及参数
• 3.4.3.1 共有峰、重叠率、n强峰
• 3.4.3.2 相似度在中药指纹图谱中的应用
• 第二部分 附子原药材成分指纹图谱研究
• 1 样品的收集与预处理
• 2 仪器与试剂
• 2.1 仪器
• 2.2 试剂
• 2.3 实验操作
• 2.3.1 供试品的提取
• 2.3.2 对照品溶液配制
• 2.3.3 缓冲体系的配制
• 2.4 色谱条件
• 3 方法与结果
• 3.1 指纹图谱的方法学考察
• 3.1.1 精密度实验
• 3.1.2 重复性实验
• 3.1.3 稳定性实验
• 3.1.4 标准曲线方程建立
• 3.2 指纹图谱共有峰及各项参数
• 3.2.1 共有峰
• 3.2.2 n强峰
• 3.2.3 重叠率及相似度
• 4 讨论
• 4.1 样品预处理条件优化
• 4.2 色谱条件的优化
• 4.3 n强峰个数的设定
• 第三部分 附子道地性研究
• 1 材料和方法
• 1.1 田间试验
• 1.2 HPLC分析
• 1.2.1 仪器与试剂
• 1.2.2 色谱方法
• 1.2.2.1 色谱条件
• 1.2.2.2 对照品溶液的制备
• 1.2.2.3 供试品溶液的制备
• 1.2.2.4 方法学考察结果
• 2 结果与分析
• 2.1 不同产地附子产量及株高比较
• 2.2 不同产地附子品质比较
• 2.3 气象因子对附子品质影响
• 2.3.1 降雨量
• 2.3.2 光照条件
• 2.4 土壤因子对附子品质影响
• 2.4.1 土壤结构与有机质含量
• 2.4.2 土壤PH值
• 2.4.3 土壤N、P、K含量
• 3 讨论
• 3.1 色谱条件优化
• 3.2 附子道地性的生态基础
• 3.3 附子道地性机理
• 参考文献
• 致谢