木芙蓉叶总黄酮的提取纯化及其药效学的研究

论文摘要

目的:研究木芙蓉叶总黄酮的提取、纯化及含量测定,初步探讨木芙蓉叶总黄酮的抑菌活性及不同极性溶剂提取物的体外抗病毒活性。方法:以总黄酮的提取率为指标,采用单因素试验和正交试验,对木芙蓉叶总黄酮的提取工艺方法进行优化,确定其最佳提取条件。采用聚酰胺树脂对木芙蓉叶总黄酮提取液进行纯化,以吸光度和比吸附量为指标,进行单因素试验研究,得到了最优的纯化方法。采用HPLC色谱法检测木芙蓉叶总黄酮提取物,比较了乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%冰醋酸（1:1:19.4:78.6）、0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（含1%冰醋酸）-甲醇（73:27）、甲醇与水梯度洗脱、乙腈与0.2%磷酸梯度洗脱效果。运用药敏纸片法和二倍稀释法,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、藤黄微球菌、普通变形菌、粪肠球菌为供试菌种,对木芙蓉叶提取物进行抑菌试验。以呼吸道合胞病毒为供试病毒,不同极性溶剂的提取物进行体外抗病毒实验进行研究。结果:木芙蓉叶总黄酮最佳提取条件为:乙醇浓度50%,料液比1:10,提取1.5 h,浸提3次。此工艺所得到的提取物中,总黄酮的提取率为22.81 mg/g。采用聚酰胺树脂对木芙蓉叶总黄酮提取液进行纯化,以吸光度和比吸附量为指标,进行单因素试验研究,得到了最优的纯化方法:上样浓度2.25 mg/mL,上样量10 mL/g,乙醇解吸浓度70%,解吸速率2 BV/h,洗脱用量为2.5 BV。用聚酰胺纯化后总黄酮的质量分数提高了45%,达到60%。采用HPLC法,以乙腈与0.2%磷酸梯度洗脱效果最好,经检测木芙蓉总黄酮提取物中金丝桃苷含量为纯化物总量的9.57%,芦丁为1.52%。木芙蓉叶提取物对大肠杆菌、藤黄微球菌、粪肠球菌、普通变形杆菌最低抑菌浓度（MIC）均为0.125 mg/mL,对藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌（MIC）均为0.25 mg/mL。结果表明提取物对上述6种抑菌效果均较好。木芙蓉叶总黄酮的水提取物及水煎样对呼吸道合胞病毒具有一定的抑制作用,水提取物的EC50为1:8.94,TI>8.94,水煎样的EC50为1:9.00,TI>9.00。结论:通过对提取、纯化工艺优化得到纯度较高的木芙蓉叶总黄酮提取物,采用HPLC法,以乙腈与0.2%磷酸梯度洗脱测定木芙蓉叶提取物中芦丁、金丝桃苷,灵敏度高,重复性好,为木芙蓉叶总黄酮检测提供了依据,并初步制定了木芙蓉叶总黄酮提取物的指纹图谱。并且其具有较好的抑菌活性,可用于天然抑菌剂的开发,但其体外抗病毒的效果并不显著。木芙蓉的水提取物及水煎样有一定的抑制呼吸道合胞病毒的作用,而其他提取物均无体外抑制作用。

论文目录

• 提要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1 木芙蓉叶
• 1.1 木芙蓉叶生药学概况
• 1.2 木芙蓉叶的民间应用和处方
• 2 木芙蓉叶的研究概况
• 2.1 化学成分的研究
• 2.2 药理学研究
• 3 黄酮类化合物研究概况
• 3.1 黄酮类化合物提取方法
• 3.2 黄酮类化合物的分离纯化方法
• 3.3 黄酮类化合物的检测
• 3.4 黄酮类化合物的生物活性
• 4 本论文的研究内容
• 第二章 木芙蓉叶总黄酮的提取工艺研究
• 1 仪器与材料
• 1.1 实验仪器
• 1.2 材料
• 2 实验方法
• 2.1 木芙蓉叶中总黄酮提取工艺流程图
• 2.2 芦丁对照品溶液的制备
• 2.3 芦丁标准曲线的绘制
• 2.4 原材料的预处理
• 2.5 木芙蓉叶提取方法的筛选
• 2.6 单因素试验优化总黄酮的提取工艺
• 2.7 正交试验设计优化总黄酮的提取工艺
• 2.8 最佳工艺条件的验证试验
• 3 实验结果
• 3.1 芦丁标准曲线的绘制
• 3.2 木芙蓉叶提取方法的筛选
• 3.3 单因素试验优化总黄酮提取率
• 3.4 正交试验设计优化总黄酮的提取工艺
• 3.5 最佳工艺条件的验证试验
• 4 小结
• 第三章 木芙蓉叶总黄酮的纯化研究
• 1 仪器与材料
• 1.1 实验仪器
• 1.2 材料
• 2 实验方法
• 2.1 聚酰胺的预处理
• 2.2 上样液的制备
• 2.3 聚酰胺对木芙蓉叶总黄酮的静态吸附及解析试验
• 2.4 聚酰胺动态吸附量试验
• 2.5 上样液浓度对吸附的影响
• 2.6 流速对吸附的影响
• 2.7 泄露曲线的考察
• 2.8 洗脱剂的选择
• 2.9 洗脱用量的考察
• 2.10 重复验证实验
• 3 实验结果
• 3.1 不同目数聚酰胺的选择
• 3.2 聚酰胺动态吸附量实验
• 3.3 上样浓度对吸附的影响
• 3.4 流速对吸附的影响
• 3.5 泄露曲线的考察
• 3.6 洗脱剂的选择
• 3.7 洗脱用量的考察
• 3.8 重复验证实验
• 4 小结
• 第四章 木芙蓉叶总黄酮提取物的分析研究
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 材料
• 2 方法
• 2.1 液相色谱条件
• 2.2 对照品溶液的配制
• 2.3 供试品溶液的配制
• 2.4 线性关系研究
• 2.5 精密度试验
• 2.6 稳定性试验
• 2.7 样品的测定
• 2.8 重复性试验
• 2.9 加样回收率试验
• 2.10 木芙蓉叶提取物指纹图谱的建立
• 3 结果
• 3.1 线性关系研究
• 3.2 精密度试验
• 3.3 稳定性试验
• 3.4 样品的测定
• 3.5 重复性试验
• 3.6 加样回收率试验
• 3.7 木芙蓉叶提取物指纹图谱的建立
• 4 小结
• 第五章 木芙蓉叶总黄酮的抑菌试验
• 1 实验材料
• 1.1 供试菌株
• 1.2 主要仪器
• 1.3 试剂
• 1.4 培养基
• 2 实验方法
• 2.1 菌悬液的制备
• 2.2 药敏纸片法
• 2.3 二倍稀释法
• 3 结果
• 3.1 药敏纸片法实验结果
• 3.2 二倍稀释法实验结果
• 4 小结
• 第六章 木芙蓉叶提取物体外抗病毒试验
• 1 实验材料
• 1.1 实验药材
• 1.2 病毒株和细胞株
• 1.3 细胞培养试剂
• 1.4 实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 细胞复苏传代
• 2.2 病毒增殖
• 2.3 病毒对MA104 细胞的毒力测定
• 2.4 各样品的细胞毒性测定
• 2.5 抑制呼吸道合胞病毒实验
• 3 结果
• 3.1 呼吸道合胞病毒毒力测定结果
• 3.2 细胞毒性实验测定结果
• 3.3 对呼吸道合胞病毒的抑制作用
• 4 小结
• 总结与展望
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 论文著作
• 详细摘要