本文主要研究内容
作者赵硕（2019）在《日本沼虾衔接蛋白Syntenin和ADP核糖基化因子2基因的分子克隆及其表达分析》一文中研究指出：日本沼虾(Macrobrachium nipponinse)是我国淡水养殖中重要的经济虾类之一。随着集约化的养殖,环境胁迫成为日本沼虾养殖过程中的关键问题,而氨氮是水产养殖中最重要的环境胁迫因子之一,能够严重影响水产动物生长发育与生理健康。因此研究日本沼虾抗氨氮胁迫的分子机制尤为重要。衔接蛋白Syntenin(MnSyn)是普遍存在于真核生物及原核生物中的胞内衔接蛋白(adaptor proteins),在细胞免疫和信号转导等细胞活动中发挥重要作用。ADP核糖基化因子2(MnArf2)是Ras基因超家族中的成员,能够调节磷脂酶D的活性,在物质运输和信号转导过程中发挥重要作用。本试验以日本沼虾为实验材料,采用RACE克隆、实时荧光定量PCR、Western blot和酶活测定等技术,对MnSyn、MnArf2基因进行了克隆鉴定和基因表达与功能检测,同时对高浓度氨氮胁迫下日本沼虾抗氧化酶的相关变化进行了测定。主要研究结果如下:首先在实验室条件下,通过对日本沼虾进行氨氮胁迫试验得到其半数致死浓度LD50(48h)为96.8mg/L。酶活性测定显示,氨氮胁迫初期日本沼虾肝胰腺、鳃和肌肉组织的总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)均出现显著的上升趋势。在胁迫后期T-AOC和SOD出现明显的下调,说明机体的抗氧化酶活性受到明显的抑制。丙二醛(MDA)的含量在胁迫初期无明显变化,胁迫24h后MDA的水平显著高于对照组,且出现逐渐上升的趋势,表明日本沼虾的组织细胞受损程度逐渐严重。通过分子克隆和RACE技术,获得了长度为2432bp的日本沼虾MnSyn基因cDNA全序列。其中包含62bp的5′UTR、1475bp的3′UTR和957bp的CDS区,其中开放阅读框编码为318个氨基酸组成的蛋白质,预测该蛋白分子量为34.26KDa。该基因编码的蛋白质有两个串联存在的PDZ结构域。同源性比较分析发现MnSyn与凡纳滨对虾、斑节对虾和日本囊对虾Syntenin基因的相似性均较高,分别依次是78%、77%和75%,在进化过程中比较保守。日本沼虾MnArf2基因全长为949bp,包含264bp的5′UTR、148bp的3′UTR以及537bp的CDS区,其中537bp开放阅读框编码为178个氨基酸组成的蛋白质,预测该蛋白分子量为19.98KDa。序列比对分析发现,MnArf2与日本对虾Arf相似性70%,与凡纳滨对虾Arf-like相似性69%。MnArf2含有典型的Switch、Interswitch区和Ploop区。Switch、Interswitch区参与调节Arf分子在GDP/GTP间相互转化,这些结构均能够反映出MnArf2在进化上是高度保守的。荧光定量检测结果显示,在氨氮胁迫后的8个时间点(0h,3h,6h,12h,24h,48h,72h,96h),日本沼虾MnSyn基因和MnArf2基因在各组织的表达量均发生了明显的变化。氨氮胁迫6h后MnSyn基因的表达量开始上升,在24h处表达量达到峰值,之后开始下降,72h后仍与对照组有显著差异。MnArf2在氨氮胁迫后6h表达量显著上调,胁迫12h处达到峰值,之后开始下调,72h后逐渐恢复到初始水平。Western Blot结果表明,MnSyn蛋白在日本沼虾的肝胰腺、鳃、肌肉、心、胃和眼柄中均有表达。且在肝胰腺和鳃组织中的表达量最高,眼柄和胃组织中的表达量较低,差异显著(P<0.05)。综合分析试验结果,氨氮胁迫后日本沼虾MnSyn和MnArf2基因均出现显著的上调表达,在肝胰腺、鳃以及心组织中表达量较高,表明MnSyn和MnArf2基因与日本沼虾受氨氮胁迫产生的免疫应答反应有关。本研究为进一步揭示日本沼虾抗氨氮胁迫的分子机制奠定了重要基础,同时也为日本沼虾的健康养殖提供了科学依据。
Abstract
ri ben zhao ha (Macrobrachium nipponinse)shi wo guo dan shui yang shi zhong chong yao de jing ji ha lei zhi yi 。sui zhao ji yao hua de yang shi ,huan jing xie pai cheng wei ri ben zhao ha yang shi guo cheng zhong de guan jian wen ti ,er an dan shi shui chan yang shi zhong zui chong yao de huan jing xie pai yin zi zhi yi ,neng gou yan chong ying xiang shui chan dong wu sheng chang fa yo yu sheng li jian kang 。yin ci yan jiu ri ben zhao ha kang an dan xie pai de fen zi ji zhi you wei chong yao 。xian jie dan bai Syntenin(MnSyn)shi pu bian cun zai yu zhen he sheng wu ji yuan he sheng wu zhong de bao nei xian jie dan bai (adaptor proteins),zai xi bao mian yi he xin hao zhuai dao deng xi bao huo dong zhong fa hui chong yao zuo yong 。ADPhe tang ji hua yin zi 2(MnArf2)shi Rasji yin chao jia zu zhong de cheng yuan ,neng gou diao jie lin zhi mei Dde huo xing ,zai wu zhi yun shu he xin hao zhuai dao guo cheng zhong fa hui chong yao zuo yong 。ben shi yan yi ri ben zhao ha wei shi yan cai liao ,cai yong RACEke long 、shi shi ying guang ding liang PCR、Western blothe mei huo ce ding deng ji shu ,dui MnSyn、MnArf2ji yin jin hang le ke long jian ding he ji yin biao da yu gong neng jian ce ,tong shi dui gao nong du an dan xie pai xia ri ben zhao ha kang yang hua mei de xiang guan bian hua jin hang le ce ding 。zhu yao yan jiu jie guo ru xia :shou xian zai shi yan shi tiao jian xia ,tong guo dui ri ben zhao ha jin hang an dan xie pai shi yan de dao ji ban shu zhi si nong du LD50(48h)wei 96.8mg/L。mei huo xing ce ding xian shi ,an dan xie pai chu ji ri ben zhao ha gan yi xian 、sai he ji rou zu zhi de zong kang yang hua neng li (T-AOC)he chao yang hua wu qi hua mei (SOD)jun chu xian xian zhe de shang sheng qu shi 。zai xie pai hou ji T-AOChe SODchu xian ming xian de xia diao ,shui ming ji ti de kang yang hua mei huo xing shou dao ming xian de yi zhi 。bing er quan (MDA)de han liang zai xie pai chu ji mo ming xian bian hua ,xie pai 24hhou MDAde shui ping xian zhe gao yu dui zhao zu ,ju chu xian zhu jian shang sheng de qu shi ,biao ming ri ben zhao ha de zu zhi xi bao shou sun cheng du zhu jian yan chong 。tong guo fen zi ke long he RACEji shu ,huo de le chang du wei 2432bpde ri ben zhao ha MnSynji yin cDNAquan xu lie 。ji zhong bao han 62bpde 5′UTR、1475bpde 3′UTRhe 957bpde CDSou ,ji zhong kai fang yue dou kuang bian ma wei 318ge an ji suan zu cheng de dan bai zhi ,yu ce gai dan bai fen zi liang wei 34.26KDa。gai ji yin bian ma de dan bai zhi you liang ge chuan lian cun zai de PDZjie gou yu 。tong yuan xing bi jiao fen xi fa xian MnSynyu fan na bin dui ha 、ban jie dui ha he ri ben nang dui ha Synteninji yin de xiang shi xing jun jiao gao ,fen bie yi ci shi 78%、77%he 75%,zai jin hua guo cheng zhong bi jiao bao shou 。ri ben zhao ha MnArf2ji yin quan chang wei 949bp,bao han 264bpde 5′UTR、148bpde 3′UTRyi ji 537bpde CDSou ,ji zhong 537bpkai fang yue dou kuang bian ma wei 178ge an ji suan zu cheng de dan bai zhi ,yu ce gai dan bai fen zi liang wei 19.98KDa。xu lie bi dui fen xi fa xian ,MnArf2yu ri ben dui ha Arfxiang shi xing 70%,yu fan na bin dui ha Arf-likexiang shi xing 69%。MnArf2han you dian xing de Switch、Interswitchou he Ploopou 。Switch、Interswitchou can yu diao jie Arffen zi zai GDP/GTPjian xiang hu zhuai hua ,zhe xie jie gou jun neng gou fan ying chu MnArf2zai jin hua shang shi gao du bao shou de 。ying guang ding liang jian ce jie guo xian shi ,zai an dan xie pai hou de 8ge shi jian dian (0h,3h,6h,12h,24h,48h,72h,96h),ri ben zhao ha MnSynji yin he MnArf2ji yin zai ge zu zhi de biao da liang jun fa sheng le ming xian de bian hua 。an dan xie pai 6hhou MnSynji yin de biao da liang kai shi shang sheng ,zai 24hchu biao da liang da dao feng zhi ,zhi hou kai shi xia jiang ,72hhou reng yu dui zhao zu you xian zhe cha yi 。MnArf2zai an dan xie pai hou 6hbiao da liang xian zhe shang diao ,xie pai 12hchu da dao feng zhi ,zhi hou kai shi xia diao ,72hhou zhu jian hui fu dao chu shi shui ping 。Western Blotjie guo biao ming ,MnSyndan bai zai ri ben zhao ha de gan yi xian 、sai 、ji rou 、xin 、wei he yan bing zhong jun you biao da 。ju zai gan yi xian he sai zu zhi zhong de biao da liang zui gao ,yan bing he wei zu zhi zhong de biao da liang jiao di ,cha yi xian zhe (P<0.05)。zeng ge fen xi shi yan jie guo ,an dan xie pai hou ri ben zhao ha MnSynhe MnArf2ji yin jun chu xian xian zhe de shang diao biao da ,zai gan yi xian 、sai yi ji xin zu zhi zhong biao da liang jiao gao ,biao ming MnSynhe MnArf2ji yin yu ri ben zhao ha shou an dan xie pai chan sheng de mian yi ying da fan ying you guan 。ben yan jiu wei jin yi bu jie shi ri ben zhao ha kang an dan xie pai de fen zi ji zhi dian ding le chong yao ji chu ,tong shi ye wei ri ben zhao ha de jian kang yang shi di gong le ke xue yi ju 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自山东农业大学的赵硕，发表于刊物山东农业大学2019-07-08论文，是一篇关于日本沼虾论文,氨氮胁迫论文,核糖基化因子论文,免疫反应论文,山东农业大学2019-07-08论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自山东农业大学2019-07-08论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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