论文摘要
目的:观察hTGF-β1 基因在体转染兔退变腰椎间盘髓核细胞后的表达,为基因治疗椎间盘退变提供实验基础。方法1.动物模型的建立:选择纯种成年新西兰大白兔24只,雌雄不限,体重平均2.5 公斤,从右侧腰椎侧前方入路,于腹膜外显露椎间盘,分别于L3-4、L4-5、L5-6、L6-7 注射0.02ml 生理盐水,术后予以分笼饲养,12 周后行兔腰椎X 光片及病理切片观察模型构建情况。2.重组质粒DNA 载体的扩增:①采用划痕法在平板培养基上接种大肠杆菌JM109 菌液,370C 过夜培养,挑选单菌落于液体培养基中370C 剧烈摇震培养至OD260=0.3～0.4。②采用CaCL2 法制备大肠杆菌感受态,然后加入含有目的基因的质粒DNA,通过420C 热休克转化至大肠杆菌体内,继续于液体培养基中过夜培养。③将培养好的菌液平铺于含有抗生素和X-gal、IPTG 的平板培养基中,通过抗药性筛选及蓝白斑实验挑选所需的大肠杆菌菌株,继续于液体培养基中过夜培养。④采用离心柱式快速回收提取质粒DNA 的方法,提取并纯化小量的重组质粒DNA,用分光光度法测定其浓度及纯度,最后用限制性内
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