论文摘要
第一部分：USP22和SIRT1蛋白在肾透明细胞癌中的表达以及临床意义背景和目的：肾透明细胞癌为多基因异常相关肿瘤。USP22是近年来发现的肿瘤干细胞新标记蛋白,而且可能与肿瘤相关蛋白SIRT1具有相互作用,因此,我们研究肾透明细胞癌中USP22和SIRT1蛋白的表达情况以及它们与临床病理之间的联系,评判USP22和SIRT1在肾透明细胞癌发生发展中的作用。方法：基因表达网站上分析USP22, SIRT1在肾透明细胞癌中的表达情况,Western blot比较肾癌细胞株与正常肾细胞株中USP22, SIRT1蛋白的表达差异,利用我们院2006-2007年间的肾透明细胞癌标本制作组织芯片,采用免疫组织化学方法检测USP22, SIRT1的亚细胞定位及其表达情况,结合临床病理参数及电话随访的生存情况,分析USP22, SIRT1的表达及其临床意义。结果：1、相较于正常肾组织及肾细胞系,USP22, SIRT1在肾透明细胞癌的人体标本和肿瘤细胞系中表达较高。2、成对的临床样本中显示,肾透明细胞癌的发生伴随着USP22, SIRT1高表达。3、在肾透明细胞癌的病理标本中,共定位于细胞核的USP22, SIRT1的表达与患者的年龄（是否大于60岁）,肿瘤浸润深度,远处转移,临床TNM分期,病理分级紧密相关。4、总共可利用的376例临床标本中,患者的随访率为64.36%（242/376）,其中,总存活201例（健康存活185例,肿瘤转移16例）,死亡41例。获访的患者中TNM临床分期的Ⅰ期68.2%（165/242）,Ⅱ期7.4%（18/242）,Ⅱ期19.8%（48/242）,Ⅳ期4.5%（11/242）。总376例手术中有根治性肾切除手术308例（开放手术266例,腔镜下42例）,肾部分切除术58例（开放手术57例,腔镜下1例）,肾根治+静脉切开取栓5例,肾根治切除术+肾上腺切除术3例,左肾根治+脾脏切除1例,右肾癌根治+右半结肠切除1例。患者的迄今存活率和无病生存率分别为83.1%（201/242）,76.4%（185/242）,患者的5年存活率和无病生存率分别为83.5%（202/242）,76.9%（186/242）。5、Log-rank单因素分析显示患者的生存与患者年龄（是否大于60岁）,肿瘤大小（直径是否小于8cm）,肿瘤浸润深度,肿瘤是否有远处转移,肿瘤的TNM临床分期,肿瘤分级,USP22和SIRT1的表达密切相关。6、Cox多因素回归分析则发现病理分级,USP22的表达和肿瘤的浸润深度是肾透明细胞癌预后的独立危险因素,而与患者生存相关的年龄,肿瘤大小,肿瘤浸润深度,肿瘤的临床TNM分期,SIRT1等则是非独立的预后因素。7、相关性分析显示：在成对的46例标本中,无论是在正常组织还是在癌组织,USP22的表达都与SIRT1具有中度的相关性（r=0.586/0.711,p<0.01）。而在总的376例样本中,USP22与SIRT1也具有密切的相关性（r=0.379,p<0.01）。结论：共定位细胞核的USP22与SIRT1表达具有相关性,而且都与肾透明细胞癌恶性程度密切相关,暗示肾癌预后独立危险因素USP22可能协同肾癌预后影响因素的SIRT1参与了肾透明细胞癌的发病过程。它们具有病程预测和作为治疗分子靶点的潜在价值。第二部分：USP22协同SIRT1参与肾透明细胞癌发病过程的分子机制背景和目的：第一部分实验证明了共定位于细胞核的USP22和SIRT1具有表达上的相关性,而且与肾透明细胞癌临床病理参数密切相关,它们协同参与了肾透明细胞癌的发病过程,在此,研究它们相关性的原因以及参与肿瘤发生的分子机理。方法：构建含有USP22和SIRT1及其截短、失活突变体USP22C185S、SIRT1H363Y、shUSP22. shSIRTl的质粒。转染USP22和SIRT1后采用共聚焦免疫荧光显色确定USP22, SIRT1的亚细胞定位,采用免疫共沉淀分析USP22与SIRT1之间的结合情况,蛋白水平上的修饰关系,报告基因实验探讨修饰后对蛋白功能的影响。基因沉默USP22和SIRT1后分别采用CCK-8和流式细胞术判断细胞增殖,凋亡情况,并利用western blot验证其原因,研究USP22和SIRT1蛋白对肿瘤生长的影响。结果：USP22, SIRT1,失活突变体USP22C185S, SIRT1H363Y以及USP22,SIRT1截短的编码蛋白都定位于细胞核中。USP22与SIRT1具有相互作用,并且USP22可以对SIRT1进行去泛素化修饰,抑制S1RT1的泛素化降解从而稳定SIRT1进而增强SIRT1功能的发挥。而沉默USP22, SIRT1则会上调P53,P21,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。结论：共定位于细胞核的USP22和SIRT1构成蛋白复合物,USP22通过去泛素化修饰来抑制SIRT1的泛素化降解,从而增强SIRT1功能的发挥。USP22协同SIRT1可能通过抑制P53,P21参与了肾透明细胞癌的发病过程。