论文摘要
大蒜在人们的日常生活和医疗保健中扮演着重要作用。大蒜素是大蒜榨取物中的一种具有生物活性的有机硫化物,对各种疾病例如心脏病、心脑血管病、关节炎、肺病、痢疾、微生物感染等具有很好的治疗作用。此外,大量的流行病学、临床医学和实验研究证实,大蒜素具有非常有效的抗肿瘤作用和比较轻微的细胞毒性,其中最吸引人的地方是它的促进肿瘤细胞凋亡的作用。大蒜素能诱导细胞DNA的降解,细胞质空泡化,Caspase蛋白酶的激活和细胞膜膨胀裂解等细胞凋亡的典型特征。因此,弄清大蒜素诱导肿瘤细胞凋亡的具体机制具有非常重要的理论和临床意义。实验目的:探究大蒜素对体外培养的EL4细胞的增殖和凋亡的作用,并初步探讨其诱导凋亡的分子机制。方法:我们采用台盼蓝拒染法测定细胞的密度和细胞的凋亡率:使用Hoechst33258荧光染料染色,荧光显微镜下拍照检测细胞凋亡时胞核的形态;采用TNUEL试剂盒检测DNA的降解情况;Rhodamine123用于检测线粒体膜电位的变化。为了研究细胞凋亡的信号途径,我们采用组织细胞化学法（IHC）测定凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2,细胞色素C、Caspase-3、-12的表达情况。结果显示:大蒜素能有效的抑制体外培养的EL4细胞的增殖,并诱导细胞的凋亡,具有显著的剂量和时间依赖效应。大蒜素处理后,EIA细胞出现典型的凋亡特征:DNA降解、细胞核固缩,最后凋亡小体形成;同时大蒜素促使线粒体膜电位迅速下降、Bax-Bcl-2比率增大,导致细胞色素C释放到胞质中,激活Caspase-3;另外,大蒜素可以上调Caspase-12的表达,说明内质网参与了细胞的凋亡。结论:大蒜素能浓度-时间依赖地抑制EL4细胞的增殖、促进细胞的凋亡。其抗肿瘤机制在于大蒜素能引起线粒体通透性增加,改变Bax-Bcl-2蛋白相对表达量,降低EL4细胞线粒体膜电位,细胞色素C释放入胞质,并且激活了Caspase的级联反应,启动细胞凋亡。同时,Caspas-12被激活,说明内质网可能参与凋亡的过程,但其详细的分子机制仍有待进一步研究。
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