ERβ抑制人前列腺癌细胞增殖的基因功能区研究

论文摘要

目的:研究雌激素受体β（ERβ）的不同基因功能区在抑制前列腺癌细胞增殖和促进细胞凋亡中的作用,为进一步研究ERβ在前列腺癌中的作用,寻找新的治疗方法提供理论依据。方法:利用PCR方法钓取ERβ各个基因功能区的DNA片段;应用基因重组技术将目的片段分别构建到pEGFP-C1真核表达质粒中;通过真核转染技术转染重组质粒到人前列腺癌细胞株PC-3M;MTT实验检测细胞的增殖活性;RT-PCR和Western Blot方法检测部分凋亡、增殖及细胞周期相关基因mRNA及蛋白在细胞中的表达。结果:⑴半定量RT-PCR检测mRNA表达水平,结果显示: P53、P21表达增加,C-myc表达降低;与ERβ全长基因相比,ERβ的D区和E/F区对这些基因的影响更为显著;⑵细胞增殖抑制实验表明:ERβ铰链区（D区）和配体结合区（E/F区）对人前列腺癌细胞株PC-3M有明显的生长抑制作用,并且呈现出时间依赖性和剂量依赖性;⑶蛋白质水平检测的结果进一步证实:CyclinD1蛋白表达下调,而活化的Caspase-3和Caspase-9蛋白表达增加;且ERβ的D区和E/F区对这些蛋白的影响较ERβ全长更为显著。结论:ERβ的D区和E/F区在抑制前列腺癌细胞增殖活性和促进细胞凋亡的功能中具有重要作用。本研究在国内外尚未见类似的报道,这将为ERβ药用价值的开发提供重要的实验资料。

论文目录

• 提要
• 英文缩写词表
• 绪论
• 1 雌激素受体（Estrogen Receptor ER） 简介
• 2 雌激素受体β（ERβ）与疾病
• 3 雌激素、雌激素受体与前列腺癌
• 4 ERβ研究展望
• 实验材料和方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 结果处理及统计分析
• 实验结果
• 1 hERβ各功能区基因重组质粒的构建
• 2 hERβ各功能区基因对PC-3M 细胞作用的功能筛选
• 3 hERβ高功能区基因对PC-3M 细胞作用的研究
• 讨论
• 1 质粒的构建与细胞转染
• 2 hERβ功能区对PC-3M 细胞的生长抑制作用
• 3 ERβ功能区抑制PC-3M 细胞的增殖
• 4 ERβ功能区诱导PC-3M 细胞的凋亡
• 5 ERβ功能区抑制PC-3M 细胞增殖、诱发凋亡的机制
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢