论文摘要
本研究利用分子生物学、病毒学和免疫学等技术和手段,以解决我国现有山羊痘弱毒疫苗存在的安全性问题。首先针对病毒本身着手,分别通过缺陷或缺失病毒TK基因、serpin基因和ORF8～ORF18之间序列,以期在保持免疫原性的同时使病毒致弱。结果通过一系列实验研究,成功获得一株性状稳定,并保持形态、生长性能和免疫原性不变,但对山羊致病力有所降低的TK基因缺陷毒株;成功构建了一株敲除掉ORF8与ORF18之间9个ORF,长达7kb基因组片段的重组山羊痘病毒和另一株serpin基因缺陷的重组山羊痘病毒;证实了山羊痘病毒serpin蛋白可通过抑制caspase-8活性而抑制细胞凋亡。本研究建立了能同时检测并区分羊痘病毒和羊口疮病毒的二重PCR方法;利用改造的基于甲病毒复制子的表达载体和口蹄疫病毒2A基因,构建了两个分别表达山羊痘病毒A27L、L1R、A33R和B5R蛋白的自杀性DNA表达质粒,并证实它们能诱导动物产生特异的体液免疫和细胞免疫应答,减轻强毒攻击后出现的临床症状,此外还能降低弱毒疫苗对山羊的致病力,而不影响其免疫原性。上述研究为研制安全、高效的山羊痘弱毒疫苗株和病毒载体奠定了基础,并为揭示山羊痘病毒以及其他痘病毒的致病和免疫调控机理提供了参考数据。
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