论文摘要
胆囊收缩素（Cholecystokinin，CCK）是一种广泛存在于胃肠道和中枢神经系统的脑肠肽，具有多种生理学功能。肠道中的CCK除了促进胆囊收缩以外，还可以调节胰酶的分泌和胰腺的生长、胃肠蠕动，抑制胃酸分泌，参与饱腹信号的传导。作为在脑内含量最丰富的脑肠肽之一，CCK在神经系统内参与了多种生理过程并发挥着重要的功能，如抑制进食、抗焦虑、镇痛、调节血压和增强记忆等。但是，迄今为止人们对CCK在脑中发挥作用的具体机制还不清楚；对CCK在脑中的许多功能还存在着很大的争论，如CCK是否能通过中枢神经系统对动物的饮食实现长期的调节?CCK是否具有神经保护作用并能增强记忆?CCK与某些神经精神疾病（如Parkinson’s disease、精神分裂症）的关系也是研究人员力在解决的问题。目前，研究人员对CCK多肽及其受体进行了多方面研究，仍没有建立CCK转基因的小鼠。为了更好的研究CCK在中枢神经系统的功能，本实验采用神经特异性启动子PDGF，建立了在神经系统特异性表达CCK的转基因小鼠并对CCK对小鼠摄食行为和体重的影响进行了初步探讨。实验分为3部分：转基因表达载体的构建；表达载体在神经母细胞瘤细胞中的表达；转基因小鼠的鉴定及CCK对饮食调节的初步探讨。扩增CCK cDNA编码区，克隆到含有神经特异性启动子PDGF的载体里。用表达质粒瞬时转染人神经母细胞瘤SHSY-5Y细胞，Western Blot显示构建质粒在体外表达。酶切含有PDGF启动子、CCK目的片断、PolyA的片断进行显微注射。筛选F0代转基因阳性鼠，13只小鼠中3只为阳性。Western Blot显示CCK在转基因鼠脑、小肠组织特异性表达。比较3个首建鼠后代与野生鼠脑组织CCK表达量的差异，3个Founder鼠脑中外源CCK都有表达。其中，在两只（8号、12号）脑中，表达量增加约1倍，在一只（20号）脑内表达量增加约2倍。将动物分为转基因组和阴性对照组，并给与正常饮食和高脂饮食。初步动物实验结果经t检验显示：正常饮食情况下，转基因雄鼠体重低于阴性对照鼠8.02％（27.61±1.67g vs 30.02±1.04g，P＜0.05），转基因雌鼠低于对照鼠2.36％（21.48±0.41g vs 22.00±1.02g，P=0.364）；高脂饮食情况下，转基因雌鼠体重低于阴性对照鼠6.55％（21.83±0.54g vs 23.36±1.09g，P＜0.05），转基因雄鼠低于对照鼠5.39％（27.56±2.04g vs 29.13±1.47g，P=0.144）。对各组小鼠进食进水量监测显示：给与正常饮食时，CCK降低了雄鼠摄食量，增加雌鼠摄食量；高脂饮食时，CCK增加了小鼠摄食量；对摄水量无显著影响。分析认为，CCK可能通过调节小鼠摄食量和物质代谢而降低其体重。实验结果初步显示，CCK对小鼠摄食行为有影响，是调节小鼠摄食和体重的一个重要神经肽。