泡球蚴囊液对原代培养大鼠肝细胞增殖影响的初步研究

论文摘要

目的1.成功建立大鼠肝细胞的无血清原代培养体系。2.探讨泡球蚴囊液对体外无血清原代培养大鼠肝脏细胞增殖的影响。方法1.以Wistar大鼠作肝细胞供者,采用胶原酶肝脏原位灌流消化法分离大鼠肝细胞,并以1×106的密度接种于I型胶原铺底的直径35mm的培养皿,分别采用血清和无血清培养24h和48h,并在肝细胞形态学和肝细胞增殖指数上对两者进行比较,建立大鼠肝细胞无血清原代培养体系。2.大鼠肝细胞无血清培养体系建立后,分别用无菌的泡球蚴囊液及无血清培养液与大鼠肝细胞共培养24h和48h,培养期间用荧光倒置显微镜观察大鼠肝细胞的形态学改变,用流式细胞仪测定大鼠肝细胞的细胞周期;同时将分离所得的大鼠肝细胞以1×105的密度接种于I型胶原铺底的96孔培养板,无血清培养后,采用MTT法检测泡球蚴囊液对大鼠肝脏细胞是否有毒性作用。结果1.大鼠肝细胞无血清培养体系的建立:大鼠肝细胞活细胞分离存活率>90%,与血清原代培养的肝细胞相比,无血清原代培养的肝细胞生长良好,24h和48h肝细胞增殖指数略微增加,差异无统计学意义(P>0.05)。2.与对照组相比,与泡球蚴囊液共培养的肝细胞贴壁生长良好;MTT法显示泡球蚴囊液对肝细胞无细胞毒性作用;泡球蚴囊液处理24小时后肝细胞增殖指数(PI)由82.0%±6.0%降至49.35%±4.0%;处理48小时后肝细胞增殖指数(PI)由67%±10%降低至27.61%±6%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.成功建立大鼠肝细胞无血清培养体系。2.泡球蚴囊液对于体外培养的大鼠肝细胞无毒害作用,但对肝细胞的增殖有一定的抑制作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 1. 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要试剂和酶
• 1.3 主要生化试剂
• 1.4 主要仪器
• 2. 方法
• 2.1 大鼠肝细胞无血清培养体系的建立
• 2.2 泡球蚴囊液对无血清原代培养大鼠肝细胞增殖情况的影响
• 结果
• 1. 大鼠肝细胞无血清培养体系的建立
• 2. 泡球蚴囊液对无血清原代培养大鼠肝细胞增殖情况的影响
• 讨论
• 1. 胶原酶肝脏原位灌流消化法分离肝细胞
• 2. 大鼠肝细胞无血清原代培养体系的建立
• 3. 泡球蚴囊液对体外无血清原代培养大鼠肝细胞增殖情况的影响
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 导师评阅表