论文摘要
研究背景卵巢癌是女性生殖系统的三大恶性肿瘤之中发病最为隐匿的一种，在女性三大肿瘤中，卵巢癌新增病例位居第二，而死亡病例位居第一。卵巢癌临床发现时很大部分已经有腹水、远处转移等中晚期症状，错过了手术治疗的最佳时机。所以卵巢癌早期诊断较少，五年生存率较低，这促使医学工作者不断探索新的诊断和治疗方法来预防和治疗卵巢癌。在结肠癌、乳腺癌、胆管癌等肿瘤的研究中发现，环氧合酶-2（Cycloxygenase，COX-2）表达的上调和过氧化物酶体增生物激活受体γ（Peroxisome Proliferator-activated receptor，PPARγ）的表达抑制在肿瘤的发展过程中起着重要的作用，而且两者之间存在着相互作用。同时，对免疫组织化学染色的研究结果显示，在卵巢癌组织中存在着COX-2的过表达和PPARγ的低表达。这提示COX-2和PPARγ可能在卵巢癌发生发展过程中起着重要的作用。塞来昔布是特异性的COX-2抑制剂，通过抑制COX-2途径发挥抗炎作用。并通过COX-2依赖性和COX-2非依赖性方式发挥抗肿瘤的作用。在塞来昔布应用的过程中可以通过PPARγ的激活来发挥部分的抗肿瘤作用。在应用塞来昔布后表现为：抑制细胞生长和增殖，增加细胞凋亡，抑制肿瘤的侵袭和转移，使细胞停滞于G0／G1期。吡格列酮是人工合成的特异型的PPARγ激动剂。吡格列酮通过激活PPARγ转录出多种细胞因子发挥抗肿瘤作用，吡格列酮还通过PPARγ非依赖性方式发挥抗肿瘤的作用。吡格列酮通过抑制COX-2部分的活性来抑制肿瘤的发生和发展。吡格列酮引起肿瘤细胞生长和增殖抑制，凋亡增加，停滞于G1期，抑制肿瘤新生血管的形成，抑制侵袭和转移。由于塞来昔布和吡格列酮在发挥抗肿瘤作用过程中存在着共同的作用环节。所以，塞来昔布和吡格列酮有可能在肿瘤细胞中共同发挥抗肿瘤作用。本研究通过观察单独或联合应用不同浓度塞来昔布、吡格列酮对卵巢癌SKOV3细胞生长和COX-2 mRNA表达的影响，探讨其在卵巢癌发生、发展过程中的作用并为卵巢癌的临床治疗提供理论依据。目的探讨同时靶向于COX-2和PPARγ的治疗方法是否比单独作用于一种更有效，并为卵巢癌的临床治疗提供理论依据。方法1．用MTT法在不同时间（24h，48h，72h）检测应用不同浓度塞来昔布（25μmol／l、50μmol／l、100μmol／l）、吡格列酮（25μmol／l、50μmol／l、100μmol／l）及塞来昔布、吡格列酮联合应用（25+25μmol／l、50+50μmol／l、100+100μmol／l）对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响，并计算出相应的细胞存活率。2．用RT-PCR法检测应用不同浓度塞来昔布（25μmol／l、50μmol／l、100μmol／l）、吡格列酮（25μmol／l、50μmol／l、100μmol／l）及塞来昔布、吡格列酮联合应用（25+25μmol／l、50+50μmol／l、100+100μmol／l）对卵巢癌SKOV3细胞COX-2 mRNA表达的影响。结果1．不同浓度（25μmol／l、50μmol／l、100μmol／l）塞来昔布组吸光光度值在不同时段（24h，48h，72h）较对照组均明显降低，相应细胞存活率25μmol／l（79.62％，61.41％，53.58％），50μmol／l（49.53％，37.62％，26.16％），100μmol／l（39.50％，25.40％，15.85％），差异具有统计学意义（P＜0.05）。不同浓度（25μmol／l、50μmol／l、100μmol／l）吡格列酮组吸光光度值在不同时段（24h，48h，72h）较对照组均明显降低，相应细胞存活率25μmol／l（94.98％，71.06％，66.92％），50μmol／l（93.42％，63.50％，56.98％），100μmol／l（89.97％，50.32％，40.38％），差异具有统计学意义（P＜0.05）。与相应时段、相应浓度塞来昔布组、吡格列酮组相比，塞来昔布、吡格列酮合用组吸光光度值明显下降，相应细胞存活率25+25μmol／l（75.86％，55.79％，46.92％），50+50μmol／l（41.69％，25.40％，13.58％），100+100μmol／l（32.60％，13.34％，6.54％），差异具有统计学意义（P＜0.05）。2．不同浓度（25μmol／l、50μmol／l、100μmol／l）塞来昔布组COX-2 mRNA表达水平（0.726±0.064，0.507±0.032，0.446±0.041）均明显低于对照组（0.957±0.082），差异具有统计学意义（P＜0.05）。不同浓度（25μmol／l、50μmol／l、100μmol／l）吡格列酮组COX-2 mRNA表达水平（0.756±0.073，0.679±0.038，0.539±0.014）均明显低于对照组（0.957±0.082），差异具有统计学意义（P＜0.05）。不同浓度（25+25μmol／l、50+50μmol／l、100+100μmol／l）塞来昔布、吡格列酮合用组COX-2 mRNA表达水平（0.578±0.046，0.435±0.093，0.207±0.008）均明显低于对照组（0.957±0.082），差异具有统计学意义（P＜0.05）。而且塞来昔布、吡格列酮合用组COX-2 mRNA表达水平明显低于相应浓度塞来昔布组和相应浓度吡格列酮组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论1．单独及联合应用COX-2抑制剂塞来昔布和PPAR激动剂吡格列酮均可在体外抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖和COX-2 mRNA的表达。2．与单用一种药物相比，塞来昔布、吡格列酮两药合用能更大程度地抑制SKOV3细胞的增殖和COX-2 mRNA的表达，提示两者有协同抗肿瘤作用。