枇杷叶三萜酸对慢性支气管炎防治作用的部分机制研究

论文摘要

慢性支气管炎（chronic bronchitis,CB）是一种常见的慢性非特异性呼吸系统疾病,主要临床特征为反复发作的咳嗽、咳痰或伴喘息。其发病率高,病情反复,可并发阻塞性肺气肿,甚至肺动脉高压、肺原性心脏病等。目前认为,大气污染、吸烟、病原体感染及过敏因素等与慢性支气管炎的发病密切相关,但发病后的机体免疫功能状态则影响了慢性支气管炎的发生和发展。因此,纠正或调节机体免疫功能紊乱可能是防治慢性支气管炎的重要手段之一。慢支的治疗,目前应用较多着眼于抗炎、镇咳、平喘作用的研究,但尚无疗效很满意的药物,而通过使用改善机体免疫功能状态的免疫调节药物,尤其是具有免疫调节作用的中药来减少细胞因子、炎症介质等促炎因素的产生,从而抑制慢支炎症进展,可能是慢支治疗的新思路。枇杷叶是蔷薇科枇杷属枇杷Eriobotryajaponica（Thunb）Lindl的叶,一直是我国传统医药治疗呼吸道炎症性疾病的常见中药之一,本课题组前期在国家自然科学基金资助下（NO:30371766）证实枇杷叶的有效活性部位为三萜酸。枇杷叶三萜酸（triterpene Acids of Loquat Leaf,TAL）有高效、低毒的作用特征,并具有明显的抗炎及免疫调节作用,对慢支具有较理想的防治作用。肺泡巨噬细胞（alveolar macrophages,AM）是肺部炎症反应细胞因子、生长因子、炎症介质、氧自由基的重要来源,是肺内重要的防御、保护和调节细胞。AM的激活是肺部炎症反应的重要始动因素。前期研究表明TAL灌胃给药可明显降低慢支大鼠肺组织匀浆中TNF-a、IL-8、IL-1水平,升高IL-10的表达,并对慢支大鼠气道粘膜上皮细胞NF-κB、ICAM-1的蛋白表达具有一定的抑制作用。此外TAL能明显抑制慢支大鼠AM自由基的产生,抑制炎症介质PGE2及LTB4的合成及释放。一氧化氮（NO）是一多功能分子,在呼吸系统的生理和病理过程中起重要作用,因此研究TAL对其是否具有药理作用也显得尤为关键。此外对于AM等细胞激活的分子机制的目前尚不明确。鉴于MAPK信号传导通路在炎症反应中的重要作用,本课题旨在前期研究的基础上,以AM为平台,MAPK信号通路为研究对象,研究慢支大鼠AM MAPK信号传导通路并探讨TAL对其信号传导通路的影响,从而进一步阐明TAL对慢性支气管炎防治作用的细胞分子机制,为将其开发为治疗慢支的新药提供试验依据。课题为国家自然科学基金资助项目（NO:30572355）。主要研究内容包括以下三个方面:1.枇杷叶三萜酸对慢性支气管炎大鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮合酶及一氧化氮表达的影响复制大鼠慢支模型,通过TAL灌胃给药治疗,观察TAL对CB大鼠AM iNOS表达、活性及NO释放的影响。结果显示:TAL抑制CB大鼠AM iNOS的表达及其活性,从而减少NO的释放,这可能是其对慢支的治疗与防治作用机制之一。2.慢支大鼠肺泡巨噬细胞内MAPK信号传导通路及其他通路的关系分别应用MAPK通路上游信号蛋白（PTK,PI3K,Akt,PKC）的特异性阻滞剂预处理AM,观察下游蛋白磷酸化水平,以确定转录前调节相关信号蛋白。结果显示:Genistein可以不同程度的抑制PKC、PI3K/Akt、MAPK通路磷酸化的程度;LY294002可以抑制PI3K/Akt磷酸化的水平,同时诱导p-p38、p-JNK的高表达,对PKC/ERK这条经典途径的磷酸化也有一定的激活作用:Calphostin C阻断PKC的磷酸化,对p-ERK水平有较大影响,而对p-p38和p-JNK则影响不大。推出大鼠慢支模型大鼠AM中LPS信号转导MAPK通路可能为PTK—PI3K/Akt—JNK/p38或者PTK—PI3K—PKC—ERK。3.枇杷叶三萜酸（TAL）治疗慢性支气管炎的作用位点研究基于第二部分的研究,进一步探讨TAL对MAPK通路的转录前信号蛋白的作用环节。发现TAL对p-p38,p-JNK,p-ERK,p-PKC及p-Akt皆有一定抑制作用（其中对p38和JNK磷酸化水平有显著的抑制效应）,而对p-PI3K,其作用不甚明显;同时,TAL对模型组TLR4受体水平的增高也无明显的降低作用。提示TAL对MAPK调控可能发生在PI3K下游某个环节,具体机制还有待于进一步研究。

论文目录

• 英文缩略词
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• 正文
• 实验一 枇杷叶三萜酸对慢性支气管炎大鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮合酶及一氧化氮达的影响
• 前言
• 实验材料
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 实验二 慢支大鼠肺泡巨噬细胞内MAPK信号传导通路及其他通路的关系
• 前言
• 实验材料
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 实验三 枇杷叶三萜酸治疗慢性支气管炎的作用位点研究
• 前言
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢
• 综述