韭菜抗常见病原菌活性成分分析

论文摘要

【目的】本研究选取具有广谱抗菌活性的韭菜为研究对象,对其有效成分进行分离和筛选,以期获得性能稳定的抗菌活性成分,拟为开发新型抗菌类药物及挖掘韭菜药用潜力提供科学依据。【方法】采用水蒸汽蒸馏法和有机溶剂萃取法分别提取韭菜不同组分,以体外药物敏感试验筛选韭菜抗菌活性组分,参照中国药典进行抗菌活性组分稳定性测试;采用生物活性追踪法、硅胶柱色谱层析、薄层层析、凝胶柱色谱层析对抗菌活性组分进行系统的筛选和分离纯化,对筛选到的化学成分进行气-质联用分析,以确定具有抗菌活性的化合物。【结果】（1）体外药物敏感试验表明,韭菜乙酸乙酯萃取物和挥发油相为主要抗菌活性组分。韭菜乙酸乙酯萃取物对不同细菌均表现出不同程度的抑制,粪肠球菌ATCC33186抑菌圈直径大于1.500cm,枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌ATCC27853、猪链球菌H9801、痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC25922、鸡白痢沙门菌、普通变形杆菌、蜡状芽孢杆菌、猪伤寒沙门菌、大肠杆菌O139、大肠杆菌O2、大肠杆菌078、大肠杆菌O8、猪霍乱沙门菌、鸡伤寒沙门菌和鼠伤寒沙门菌均大于2.200cm,且对供试病原菌的最小抑菌浓度在2.5mg/mL～27mg/mL;挥发油对所供试细菌呈现全部抑制,最小抑菌浓度在2μL/mL～32μL/mL。（2）韭菜乙酸乙酯萃取物药物稳定性分析表明,高温对乙酸乙酯萃取物的抑菌活性有较大的影响,其抑菌活性随着处理时间的延长逐渐减弱。通过恒温加速试验与长期试验,4℃±2℃保存1个月～6个月,各处理间抑菌活性均无显著性差异（p>0.05）,显示4℃±2℃是乙酸乙酯萃取物保存的最佳温度;分别在25℃±2℃和37℃±2℃时保存时, 3个月、6个月处理与0月相比,差异显著（P<0.05）,相互之间差异不显著,9个月和12个月与0月相比,差异极显著（P<0.01）;在模拟胃肠环境下,对普通变形杆菌、铜绿假单胞菌、鸡白痢沙门菌3种细菌的抑菌活性与未处理组相比较差异极显著（P<0.01）,对其它细菌则未表现出明显差异（p>0.05）。（3）抗菌活性组分挥发油GC-MS分析共鉴定出17个组分,主要为二丙烯基-双硫醚（39.308%）、甲基-丙烯基-双硫醚（32.763%）、甲基-丙烯基-三硫醚（12.157%）、二丙烯基-三硫醚（7.330%）、二甲基-三硫醚（3.405%）、丙烯硫基-乙酸甲酯（2.078%）和1,3-二硫己烷（1.171%）。对乙酸乙酯萃取物生物活性追踪和化学成分分离,分离得到具有抗菌活性的2个馏分,均为脂肪酸类化合物,经GC-MS检测其主要抗菌活性成分为十六烷酸（棕榈酸）,在两个馏分中分别占到95.798%和68.630%。【结论】（1）韭菜中抗菌活性组分为乙酸乙酯萃取物和挥发油,对所供试病原菌的最小抑菌浓度分别达到2.5mg/mL～27mg/mL和2μL/mL～32μL/mL。（2）韭菜抗菌活性组分乙酸乙酯萃取物的抗菌活性在4℃±2℃最为稳定,抗菌活性在各处理间无显著差异（p>0.05）;在37℃±2℃保存6个月时,抑菌圈为2.940±0.032cm,显示出较好的药效持续性。在模拟胃肠环境中,只对普通变形杆菌、铜绿假单胞菌、鸡白痢沙门菌3种细菌的抑菌活性有影响,与未处理相比差异极显著（P<0.01）,对其它供试细菌的抗菌活性均无影响。（3）韭菜抗常见病原菌有效活性成分主要为二丙烯基-双硫醚、甲基-丙烯基-双硫醚、甲基-丙烯基-三硫醚（分别占韭菜挥发油的39.308%、32.763%、12.157%）及十六烷酸。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩写词英汉对照表
• 第一章 绪论
• 1 韭化学成分及其生物活性研究进展
• 1.1 韭生物学特征
• 1.2 韭化学成分研究
• 1.2.1 有机含硫化合物
• 1.2.2 含氮化合物
• 1.2.3 核苷类
• 1.2.4 甾体皂苷
• 1.2.5 其它成分
• 1.3 韭生物活性研究
• 1.3.1 抗菌杀虫活性
• 1.3.2 抗氧化作用
• 1.3.3 抗肿瘤作用
• 1.3.4 抗突变作用
• 1.3.5 免疫增强及调节作用
• 1.3.6 温肾助阳作用
• 1.3.7 其他活性
• 1.4 展望
• 2 研究目的与意义
• 3 研究内容和方法
• 3.1 韭菜有效成分初步分离
• 3.2 韭菜抗常见病原菌活性成分筛选
• 3.3 韭菜抗常见病原菌提取液稳定性分析
• 3.4 韭菜抗常见病原菌活性成分分离及分析
• 第二章 韭菜抗菌活性成分的提取与筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 药材与菌种
• 1.1.2 仪器与试剂
• 1.2 方法
• 1.2.1 提取与初步分离
• 1.2.2 菌种活化及浓度测定
• 1.2.3 体外药物敏感试验
• 1.2.4 最小抑菌浓度测定
• 2 结果与分析
• 2.1 韭菜不同提取液的体外药物敏感试验
• 2.2 最小抑菌浓度测定结果
• 3 讨论
• 第三章 韭菜乙酸乙酯萃取物的抗菌稳定性分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 材料与菌种
• 1.1.2 仪器与试剂
• 1.2 方法
• 1.2.1 高温试验
• 1.2.2 模拟胃肠环境影响试验
• 1.2.3 恒温加速试验
• 1.2.4 长期试验
• 2 结果与分析
• 2.1 高温试验
• 2.2 模拟胃肠环境影响试验
• 2.3 恒温加速试验
• 2.4 长期试验
• 3 讨论
• 第四章 韭菜抗菌活性成分的分离与分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 材料与菌种
• 1.1.2 仪器与试剂
• 1.2 方法
• 1.2.1 韭菜挥发油化学成分GC-MS 分析
• 1.2.2 韭菜乙酸乙酯萃取物化学成分分离及分析
• 2 结果与分析
• 2.1 韭菜挥发油化学成分GC-MS 分析
• 2.2 韭菜乙酸乙酯萃取物硅胶柱层析活性馏分的筛选
• 2.3 韭菜乙酸乙酯萃取物硅胶柱层析各馏分分离鉴定及活性筛选
• 3 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介
• 导师简介