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茶树菇凝集素（Agrocybe cylindracea Lectin）的分离纯化及部分性质研究

2020-11-21阅读(982)

茶树菇凝集素（Agrocybe cylindracea Lectin）的分离纯化及部分性质研究

论文摘要

本文对茶树菇凝集素（Agrocybe cylindracea lectin, ACL）的研究主要包括分离纯化及部分性质研究。 将茶树菇子实体撕碎,用搅拌机捣碎,加入生理盐水拌均,4℃静置过夜后离心,再经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose离子交换、Sephacryl S-200分子筛层析及CM-Sepharose离子交换,得到纯化的茶树菇凝集素样品,冻干。Sephacryl S-200分子筛凝胶过滤测得ACL表观分子量31.2kD,对该样品进行SDS-PAGE电泳分析,结果得到两条带,且分子量约为16.1kD和15.3kD,表明ACL是由两个不同亚基组成的二聚体。 对兔血细胞以及健康人血A,B,AB,O型的活性人作活性检验,发现表明ACL对兔及健康人A、B和AB型血细胞都有凝集作用,只是相对A型血细胞凝集能力弱些。 ACL的荧光光谱研究表明在激发光为280nm时,其最大荧光发射峰在337nm处,荧光光谱未见有酪氨酸（Tyr）残基的发射峰,表明Tyr残基的荧光基本上通过能量转移到Trp上,使荧光强度增强,在激发光谱为295nm时,其最大荧光发射峰也在337nm处,比游离Trp的最大荧光发射峰（348nm）蓝移了近10nm,说明Trp周围的极性较弱,处于疏水的微环境。 用NBS修饰Trp,Trp的β-吲哚基的破坏使活性完全丧失,表明Trp对凝血活性是至关重要的;经计算测得每分子ACL中含有2.09个Trp残基;Arg、Tyr、Ser、巯基被修饰后,ACL的凝血活性并未受到大的影响;用NEM修饰巯基,测得没分子中有1个巯基。用DEPC对组氨酸的β-咪唑进行特异化学修饰后,其凝血活性没有明显的下降,表明β-咪唑基不是凝血活性的必

论文目录

  • 一、摘要
  • 二、Abstract
  • 三、论文
  • 1 引言
  • 2 实验材料和试剂仪器
  • 2.1 实验材料
  • 2.2 实验仪器
  • 2.3 实验试剂
  • 3 实验方法
  • 3.1 茶树菇凝集素的分离纯化
  • 3.1.1 茶树菇凝集素粗品的制备
  • 3.1.2 DEAE-Sepharose FF离子交换层析
  • 3.1.3 Sephacryl S-100分子筛层析
  • 3.1.4 CM-Sepharose FF阳离子交换柱层析
  • 3.2 浓度测定
  • 3.3 纯度鉴定
  • 3.4 活性测定
  • 3.5 Sephacryl S-100分子筛层析测定表观分子量
  • 3.6 茶树菇凝集素的荧光光谱
  • 3.7 性质检测
  • 3.7.1 茶树菇凝集素凝血活性的测定
  • 3.7.2 茶树菇凝集素耐热性测定
  • 3.7.3 茶树菇凝集素耐酸碱测定
  • 3.7.4 茶树菇凝集素部分基团的特异性化学修饰
  • 3.7.4.1 Arg的修饰
  • 3.7.4.2 His的修饰
  • 3.7.4.3 Ser／Thr的修饰
  • 3.7.4.4 二硫键和巯基的修饰
  • 3.7.4.5 Tyr的修饰
  • 3.7.4.6 Trp的修饰与数目测定
  • 3.7.5 金属离子对茶树菇凝集素活性的影响
  • 3.7.6 变性剂对茶树菇凝集素活性的影响
  • 3.7.6.1 盐酸胍对茶树菇凝集素活性的影响
  • 3.7.6.2 脲对茶树菇凝集素活性的影响
  • 3.7.6.3 SDS对茶树菇凝集素活性的影响
  • 3.7.7 茶树菇凝集素的荧光淬灭研究
  • 3.7.7.1 KI对茶树菇凝集素活性的荧光淬灭研究
  • 3.7.7.2 CsCl对茶树菇凝集素活性的荧光淬灭研究
  • 3.7.7.3 丙烯酰胺对茶树菇凝集素活性的荧光淬灭研究
  • 3.7.7.4 碘乙酸对茶树菇凝集素活性的荧光淬灭研究
  • 4 结果与讨论
  • 4.1 茶树菇凝集素的分离纯化
  • 4.2 茶树菇凝集素纯度和分子量测定
  • 4.3 性质检测
  • 4.3.1 茶树菇凝集素凝血活性的测定
  • 4.3.2 天然状态下茶树菇凝集素的荧光光谱
  • 4.3.3 茶树菇凝集素耐热性测定
  • 4.3.4 茶树菇凝集素耐酸碱测定
  • 4.3.5 茶树菇凝集素部分基团的特异性化学修饰
  • 4.3.5.1 茶树菇凝集素Arg、His、Ser／Thr等残基的特异性化学修饰
  • 4.3.5.2 茶树菇凝集素巯基的特异性化学修饰
  • 4.3.5.3 茶树菇凝集素Tyr残基的特异性化学修饰
  • 4.3.5.4 茶树菇凝集素Trp残基的特异性化学修饰
  • 4.3.6 金属离子对茶树菇凝集素活性的影响
  • 4.3.7 变性剂对茶树菇凝集素活性的影响
  • 4.3.7.1 盐酸胍对茶树菇凝集素活性的影响
  • 4.3.7.2 脲对茶树菇凝集素活性的影响
  • 4.3.7.3 SDS对茶树菇凝集素活性的影响
  • 4.3.8 茶树菇凝集素的荧光淬灭研究
  • 4.3.8.1 KI对茶树菇凝集素活性的荧光淬灭研究
  • 4.3.8.2 CsCl对茶树菇凝集素活性的荧光淬灭研究
  • 4.3.8.3 丙烯酰胺对茶树菇凝集素活性的荧光淬灭研究
  • 4.3.8.4 碘乙酸对茶树菇凝集素活性的荧光淬灭研究
  • 5 小结
  • 6 参考文献
  • 四、文献综述
  • 五、致谢
  • 六、研究生期间发表的论文
  • 七、声明

    • 相关论文文献

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