论文摘要
人巨细胞病毒（Human Cytomegalovirus,HCMV）属于疱疹病毒科的β疱疹病毒亚科,是一种机会致病病原体,在人群中感染率达50%～80%。一般情况下,HCMV感染健康个体后无临床症状或者临床症状不明显,但是病毒可以以潜伏状态存在于宿主的外周血以及骨髓中,且能够通过血液制品或者固体器官移植进行传播。当机体免疫力低下时,潜伏的HCMV经活化后可导致致命性疾病。在骨髓移植患者中,HCMV感染所致死亡率仅次于移植物抗宿主病。鉴于HCMV潜伏感染对免疫力低下人群的严重危害,研究者对HCMV潜伏感染进行了深入的研究。由于HCMV感染具有严格的宿主要求,因此在整体水平的研究上,研究者多选择MCMV（Murine Cytomegalovirus）感染小鼠作为研究对象。MCMV感染小鼠是HCMV研究的重要动物模型,主要是由于MCMV与HCMV的基因组之间具有线性相关性,MCMV含有的约200个开放阅读框与HCMV具有45.2%的相似性,所编码的蛋白有78个具有同源性。MCMV和HCMV在免疫缺陷或者免疫抵抗力不成熟的宿主体内都可导致严重的感染,并产生相似的临床症状,特别是对造血系统的影响方面。研究发现,MCMV感染小鼠后,小鼠造血系统细胞发生的改变主要表现为:外周血白细胞减少、体内血小板数量下降、骨髓中单核-巨核细胞前体细胞数量减少以及粒细胞-巨噬细胞集落形成单位（Granulocyte-Macrophage colony forming unit ,CFU-GM）和爆式红系集落形成单位（Erythroid burst forming unit,BFU-E）数量减少等,这些发现都与HCMV感染人类造血细胞非常类似。因此,用MCMV感染小鼠模型来研究HCMV感染对造血细胞群的效应,分析HCMV在造血细胞中原发和潜伏感染、活化以及重复感染的发病机制,对进一步研究HCMV潜伏感染以及潜伏再活化的机制有重要的理论和实际意义。研究表明,HCMV可潜伏在骨髓中,但对于究竟潜伏在骨髓的哪些细胞中尚没有确切的定论。为此,我们选择MCMV感染小鼠模型,开展了MCMV对小鼠骨髓细胞感染的研究,特别是在小鼠骨髓单个核细胞及其不同亚群细胞中的潜伏感染研究,主要工作包括:1、MCMV对骨髓单个核细胞的潜伏感染研究。体外结果显示:MCMV体外感染分离培养的骨髓单个核细胞后,在单个核细胞中可检测到MCMV DNA以及MCMV立即早期基因的转录和蛋白的表达,未检测到早期基因的转录和蛋白的表达,且MCMV感染可以抑制骨髓单个核细胞集落的形成,提示MCMV可在体外潜伏感染骨髓单个核细胞;体内结果显示:MCMV病毒液直接经腹腔接种小鼠进行体内试验,在感染后的不同时间可以在小鼠的外周血以及骨髓中检测到MCMV DNA的存在,随着感染时间的增加,小鼠骨髓单个核细胞的数量也呈先下降后上升的趋势,说明MCMV体内感染小鼠在短期内可抑制小鼠骨髓的造血功能。2、MCMV对骨髓单个核不同亚群细胞的潜伏感染研究。将骨髓单个核细胞进一步分选为不同的亚群细胞（包括lin+、lin-、lin-cd117+、lin-cd117-组分细胞）,再进行MCMV感染。结果显示:在lin+细胞可以检测到MCMV DNA的存在,并且可以检测到立即早期IE基因的转录产物和蛋白的表达,不能检测到早期E基因的转录和蛋白的表达;在MCMV感染的lin-、lin-cd117+和lin-cd117-细胞中,未检测到立即早期IE基因和早期E基因的转录产物,间接免疫荧光也并未检测到有MCMV蛋白的表达;MCMV感染的lin-cd117+造血干/祖细胞的集落形成数量明显少于正常lin-cd117+造血干/祖细胞的集落数量,即MCMV感染对小鼠骨髓造血干/祖细胞的集落形成能力可以产生一定的抑制作用,且在MCMV感染的lin-细胞中,具有干/祖细胞性质的CD117抗原的表达在MCMV感染之后比正常培养的细胞发生下调;在lin-细胞中加入细胞因子（如GM-CSF、rhEPO）或者诱导剂（如佛波酯）后可以使得MCMV在被诱导的lin-细胞中表达立即早期蛋白IEP和早期蛋白EP,即细胞因子以及诱导剂可能会在诱导细胞分化过程中促进MCMV对细胞的感染。本研究结果证实,MCMV可以潜伏感染小鼠骨髓单个核细胞及其lin+亚群细胞,并且在一定条件下可以在细胞中转录相应的基因和表达相关蛋白;含有造血干/祖细胞的lin-细胞群对MCMV可能不易感,但是,lin-细胞加入细胞因子或者诱导剂后可促进MCMV对细胞的感染,同时MCMV攻击可影响lin-cd117+造血干/祖细胞的功能和表型。我们的这些研究结果为进一步研究MCMV在骨髓中的潜伏与活化奠定了基础,具体的致病机制还有待进一步深入研究。
论文目录
相关论文文献
标签：骨髓论文; 造血干论文; 祖细胞论文; 巨细胞病毒潜伏和活化论文;