HBV相关HCC：病毒特异性免疫应答的研究

论文摘要

[目的]研究HBV相关HCC患者外周循环和肝脏局部病毒特异性T细胞的免疫应答以及两者之间的差异,以期为HBV相关性肝癌的免疫学发病机制和治疗性疫苗的研究提供一些线索。[方法]筛选肝癌患者15例,其中13例同时有外周血标本以及肝组织标本,2例仅有外周血标本。使用Elispot法检测HBcAg特异性T细胞的数量。同时,采用重组的HBsAg和HBcAg作为刺激原,利用CFSE的方法测定特异性T细胞的增殖。[结果]1.发现癌旁浸润淋巴细胞CTL总应答强度及总宽度均显著高于PBMC。癌旁浸润淋巴细对C1-C12肽段库的应答强度和宽度也显著高于PBMC。2.对三位患者用重组的HBsAg和HBcAg作为刺激原测定T细胞增殖,其中两位癌旁局部浸润淋巴细胞HBsAg特异性T细胞增殖的比例较PBMC有明显升高。3. HBsAg刺激下特异性T细胞增殖（12.02%±13.15%）与阴性对照（3.31%±2.90%）相比有升高,但没有无显著性差异（P=0.061）, HBcAg刺激下特异性增殖无显著性差异。4.比较6位HCC患者HBsAg增殖的差异,前三个患者特异性T细胞增殖比例（27.23%±12.74%）与后三位患者（5.37%±0.12）相比有显著性差异。分析T细胞增殖比例与可能的影响因素（包括HBV-DNA,年龄,AFP值）的相关性,均无显著相关性。[结论]HCC患者外周循环和癌旁局部浸润淋巴细胞HBcAg特异性CTL应答存在显著性差异,推测可能与HBV感染慢性化过程中,外周循环CTL耗竭有关,而在肝组织内的这些特异性CTL功能受到抑制,无法很好的清除HBV,反而造成肝组织损伤,是导致HBV相关HCC发生的一个重要因素。同时,发现HBsAg特异性T细胞增殖比例在外周循环和癌旁局部浸润淋巴细胞之间存在差异,并与特异性CTL应答的差异一致,进一步提示外周循环与肝组织局部的差异性。同时,发现部分HCC患者外周循环HBsAg特异性T细胞的增殖较好,而部分患者没有明显的增殖,将本实验中可以测定的可能的影响因素分别与HBsAg特异性T细胞增殖做相关性分析,均未发现有显著相关性,但由于入选例数较少,其他的影响因素尤其是肿瘤对的免疫抑制作用在现有条件下无法列入其中,可能会导致结果分析出现偏差。

论文目录

• 英文缩略词
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 1 研究背景
• 2 材料与方法
• 2.1 研究对象
• 2.2 样本采集与处理流程
• 2.3 外周血PBMC、肝组织淋巴细胞分离及冻存
• 2.4 ELISpot法测定HBcAg特异性CD8+T细胞功能
• 2.5 流式细胞仪侧CFSE标记T细胞增殖
• 2.6 统计学分析
• 3 结果
• 3.1 物理研磨自然沉降法分离肝组织单核细胞得率
• 3.2 ELISpot法测定HBcAg特异性CD8+T细胞应答结果
• 3.3 HBcAg及HBsAg特异性细胞增殖结果
• 4 讨论
• 4.1 物理研磨自然沉降法分离肝组织单核细胞得率
• 4.2 HBV相关HCC患者外周循环与肝组织局部HBcAg特异性CTL应答的比较
• 4.3 HBcAg及HBsAg刺激下T细胞特异性增殖结果
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢