利用分子标记技术分析鉴定杂交油菜种子纯度研究

论文题目: 利用分子标记技术分析鉴定杂交油菜种子纯度研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 植物学

作者: 穆建新

导师: 郭蔼光,李殿荣

关键词: 杂交油菜,种子纯度,分子标记

文献来源: 西北农林科技大学

发表年度: 2005

论文摘要: 油菜是我国的主要油料作物之一,利用油菜的杂种优势是提高产量和改良品质的重要途径,我国杂交油菜播种面积已占总播种面积的50%以上。杂交种能否发挥其杂种优势关键是种子纯度,杂交油菜中的主要杂株类型是不育系株和恢复系株,所以,杂交油菜种子纯度的鉴定即是杂交种与其父母本的鉴别。本实验应用RAPD和SSR分子标记技术,以甘蓝型油菜细胞质雄性不育杂交种秦优7号及其亲本不育系陕3A、恢复系K407为材料,对杂交油菜种子纯度鉴定技术进行了比较研究,获得了以下主要结果: 1.通过对814个RAPD随机引物和100对SSR引物的筛选,获得2个RAPD引物(S93和S469)和1对SSR引物（SA82）,能将秦优7号杂交种及其父母本同时区分开来;杂交种带型表现为父母本的互补带型,区别明显,显带清晰稳定。 2.建立了油菜微量DNA快速提取技术,用发芽3—5d的幼芽,在样品研磨前加入氯仿,使蛋白变性和大多数酶失活或钝化,防止DNA降解;省去了“抽提”和“清洗”等步骤,使提取大大简化;同时还缩短了水浴、冰浴和离心时间,加快了提取速度,提高了提取效率。 3.通过反应体系的优化,建立了适宜于杂交油菜种子纯度鉴定的RAPD和SSR反应体系。RAPD和SSR扩增体系为:20μL反应体积中,10×buffer[含（NH4）2SO4]2.0μL,Mg2+浓度2.0mmol/L,dNTP浓度0.2mmol/L,1U的Taq DNA聚合酶,模板DNA30-40ng,RAPD随机引物浓度0.25μmol/L,SSR左、右引物各2.5ng/μL。SSR反应程序选用了梯度递减的退火温度,提高扩增结果稳定性。 4.与酯酶同工酶法比较,RAPD和SSR技术能够将酯酶同功酶法难以鉴别的杂交种秦优7号及其亲本恢复系明显区分开来。SSR与RAPD标记比较,SSR具有稳定性好和带型简单易于鉴别的特点,在杂交油菜种子纯度鉴定中有着广阔的应用前景。 5.RAPD和SSR分子标记技术,在筛选合适引物的基础上,按照快速法提取DNA,建立标准化的检测体系,重复使用琼脂糖凝胶,降低检测成本,完全可以使这项技术在杂交油菜种子纯度检测中实用化。

论文目录:

摘要

ABSTRACT

第一章文献综述

1.1 农作物种子纯度鉴定方法概述

1.1.1 形态观察鉴定技术

1.1.2 物理化学鉴定

1.1.3 蛋白质电泳鉴定技术

1.1.4 分子标记鉴定法

1.2 本研究的立论依据和意义

第二章实验部分

2.1 材料与方法

2.1.1 材料

2.1.2 方法

2.2 结果与分析

2.2.1 反应条件优化

2.2.2 引物筛选及验证

2.2.3 DNA提取方法简化

2.2.4 RAPD和 SSR在杂交油菜种子纯度检测中的应用

2.2.5 分子标记在杂交油菜品种鉴定中的应用

2.3 讨论

2.3.1 引物筛选

2.3.2 DNA提取简化和成本控制

2.3.3 RAPD和 SSR的多态性

2.3.4 RAPD和 SSR的稳定性

2.3.5 SSR引物来源问题

2.4 结论

参考文献

致谢

作者简介

附录1

附录2

发布时间: 2007-04-06

参考文献

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利用分子标记技术分析鉴定杂交油菜种子纯度研究

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