论文摘要
目的 研究LMPAB对肿瘤细胞侵袭能力、血管生成、细胞凋亡和免疫调节的影响，以及对参与肿瘤转移过程的相关基因和蛋白表达的影响，探讨LMPAB抗肿瘤转移作用及其分子机制。 方法 第一部分 LMPAB抗肿瘤转移作用研究 1、LMPAB对人肝癌细胞Bel-7402侵袭能力的影响：5、10和20μg·ml-1浓度的LMPAB与Bel-7402细胞共同孵育48h。重新计数后加入铺有Matrigel Matrix的Transwell培养板上室，下室加入NIH3T3培养上清，孵育24小时后，将滤膜HE染色，光镜下计穿过滤膜的细胞数。 2、LMPAB对小鼠黑色素瘤细胞B16实验性肺转移的影响：C57BL／6小鼠尾静脉注射2×105B16细胞，次日50、100和200mg·kg-1·d-1腹腔注射LMPAB，共14天。第15天处死小鼠，解剖显微镜下计数肺转移瘤灶。 3、LMPAB对双侧肿瘤小鼠模型远端肿瘤的抑制作用：C57BL／6小鼠右侧胁部皮下接种1×106和左侧接种2×105S180肉瘤细胞建立双侧肿瘤小鼠模型，于3d、4d和5d右侧肿瘤内注射LMPAB。造模后3d、5d、7d、10d、12d、14d、17d、19d和21d，分别测量两侧肿瘤直径。于21d处死小鼠后，称量双侧肿瘤重量。 4、LMPAB对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响：于发育第7d的鸡胚绒毛尿囊膜上植入含有LMPAB的微孔滤膜载体，10d后观察鸡胚绒毛尿囊膜血管面积的变化。 5、LMPAB对基质胶诱导的新血管生成的影响：C57BL／6小鼠背部皮下注射含有VEGF、肝素钠和LMPAB的基质胶0.5ml。7d处死小鼠，取出基质胶，称量基质胶重量后，将基质胶固定、包埋并切片，采用CD34标记免疫组化法检测微血管密度。 6、LMPAB对人白血病细胞K562增殖的影响：用5、10和20μg·ml-1LMPAB与K562共同孵育48h后，采用MTT法检测LMPAB对K562生长的影响。 第二部分 LMPAB抗肿瘤转移作用的分子机制 1、LMPAB对肿瘤转移相关基因、蛋白和细胞凋亡的影响：BALR／c小鼠右侧腋窝皮下接种S180，腹腔注射50、100和200mg·kg-1·d-1LMPAB，每天1次，连续7天，给药结束后24h。称量肿瘤；ELISA法检测血清IL-12、IL-18、TNF-α含量；流式细胞仪Annexin-V-FITC／PI双染法检测肿瘤组织细胞凋亡；实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织CD44mRNA、MMP-9mRNA表达；免疫组织化学染色法检测脾脏组织INF-γ蛋白表达，肿瘤组织VEGF、nm23-H1蛋白的表达。从而系统评价LMPAB调节免疫、抑制肿瘤生长和抗肿瘤转移作用及其机制。
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相关论文文献
- [1].低分子量姬松茸多糖抑制Lovo细胞与内皮细胞黏附的作用及机制[J]. 中国老年学杂志 2014(04)
- [2].低分子量姬松茸多糖的免疫活性研究[J]. 中医药信息 2013(02)
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