用SDS-PAGE和密度扫描定量检测小麦单籽粒高、低分子量麦谷蛋白亚基

用SDS-PAGE和密度扫描定量检测小麦单籽粒高、低分子量麦谷蛋白亚基

论文摘要

1本研究检测了高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)和低分子量麦谷蛋白亚基(LMW-GS)的提取量随温度条件和提取时间的变化情况。在高温(90和65℃)时,HMW-GS和LMW-GS的提取量都很快达到最大(分别为5min和30min),延长提取时间只能使提取量降低。在较低的温度条件(-20、4、0、15、18、23、35或50℃)时,提取量的变化复杂:在18h内,HMW-GS提取量随提取时间的延长而增加,并且温度越高提取量越多,但是当提取时间达到7天时,最大提取量在-20℃,依次为0℃和4℃,而在18、23、35和50%时,HMW-GS提取量降得如此之多以致于不能用Coomassie Brilliant Blue R250检测到它们。与HMW-GS相似,27h内在较低温时LMW-GS的提取量随时间的增加而增多,但不随温度的增加(从-20到35℃)而增多(它们的提取量相似),较低温度提取条件都优于高温(90和65℃)提取条件。当提取时间为7天时23℃是LMW-GS的最佳的提取温度。多次把样品移入-70℃也有利于HMW-GS和LMW-GS的提取。2根据以上谷蛋白亚基提取特征,本研究设计了从小麦(Triticum aeativum L.)全麦粉中一次性同时完全提取MW-GS和LMW-GS方法,这个方法综合利用了90、23和70℃的温度条件和48h的较长时间。本研究优化了通过SDS-PAGE分离HMW和LMW麦谷蛋白亚基的过程,同时也优化了提取单体蛋白的温度条件和提取时间(以取得最大的谷蛋白亚基的提取量和纯度)。3本研究用一种单体蛋白作为定量标准来定量亚基(单位μg)。这种方法比其他单独定量HMW-GS或LMW-GS的方法有一些重要优势。首先,能够得到HMW-GS和/或LMW-GS相对于全部谷蛋白或全麦粉的相对含量。其次,能够得到凝胶上样品和小麦单籽粒中单个HMW或LMW亚基的绝对含量,并且这种数值可以按高低排序。4用以上方法,检测了180个小麦品种的各个麦谷蛋白亚基的质量。根据亚基分子量的范围,计算得到A区、B区、C区和D区亚基的质量和,初步分析了其分布和变异。5mg面粉的总亚基质量和,A区亚基质量和,B区亚基质量和,C区亚基质量和及D区亚基质量和的变化范围分别为21.79~352.36μg,4.12~85.01μg,5.91~102.52μg,4.82~113.75μg和8.86~135.51μg,变异系数分别为:35.07%、39.32%、37.02%、39.83%和42.66%。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 1 文献综述
  • 1.1 小麦品质概述
  • 1.2 高分子量谷蛋白亚基研究进展
  • 1.2.1 高分子量谷蛋白亚基基因定位
  • 1.2.2 高分子量谷蛋白亚基结构与功能
  • 1.2.3 HMW-GS与小麦品质的关系
  • 1.3 低分子量麦谷蛋白亚基研究进展
  • 1.3.1 LMW-GS基因定位
  • 1.3.2 LMW-GS的结构与功能
  • 1.3.3 LMW-GS与小麦品质的关系
  • 1.4 高低分子量麦谷蛋白亚基共同对小麦品质的影响
  • 1.5 麦谷蛋白亚基的提取和检测
  • 1.5.1 谷蛋白亚基的提取
  • 1.5.2 谷蛋白亚基的SDS-PAGE检测与分析
  • 2 引言
  • 3 定量分析高低分子量麦谷蛋白亚基方法的研究
  • 3.1 材料
  • 3.1.1 仪器与药品
  • 3.1.2 主要仪器设备
  • 3.1.3 药品试剂
  • 3.1.4 试剂配制
  • 3.1.5 SDS聚丙烯酰胺凝胶的制备与电泳
  • 3.2 HMW-GS和LMW-GS提取量变化特性
  • 3.3 HMW-GS和LWM-GS的完全提取
  • 3.4 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
  • 3.5 密度扫描和定量谷蛋白亚基
  • 3.6 结果与分析
  • 3.6.1 HWM-GS和LMW-GS提取量随温度条件和贮藏长短变化的特点
  • 3.6.2 完全提取HMW和LMW谷蛋白亚基的分析
  • 3.6.3 通过SDS-PAGE和密度扫描定量检测HMW-GS和LMW-GS的分析
  • 4 小麦品种间谷蛋白亚基含量变异分析
  • 4.1 材料与方法
  • 4.2 结果与分析
  • 4.2.1 谷蛋白亚基的分布与变异
  • 5 讨论
  • 6 结论
  • 参考文献
  • 附表
  • 致谢
  • 作者简介
  • 相关论文文献

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