HLA-B*1502/5801快速检测方法研究及苏南地区分布频率分析

论文摘要

目的：为了找到一种准确、简便、快速、经济的HLA-B*1502和HLA-B*5801基因型的快速筛选检测方法，使之能在临床检测中广泛应用，从而减少临床卡马西平、别嘌呤醇等药物导致的严重皮肤药物不良反应。同时，初步研究苏南地区HLA-B*1502和HLA-B*5801基因型的分布频率。方法：1.收集卡马西平导致的Stevens-Johnson综合症/中毒性表皮坏死松解症（SJS/TEN）患者血样4例，卡马西平导致斑丘疹病（MPE）患者血样4例，以及未曾服用卡马西平和别嘌呤醇的健康个体血液样本50例。2.全部提取基因组DNA后，应用PCR-SSP法对58例样本进行HLA-B*1502基因型的筛选检测，对50例健康个体样本进行HLA-B*5801基因型的筛选检测，分别统计苏南地区HLA-B*1502基因型和HLA-B*5801基因型的分布频率。3.所有基因组DNA样本，经PCR-SBT法测序分型验证。4.研究应用Pfu高保真聚合酶介导的SNP位点基因分析方法筛选HLA-B*1502基因型的可行性。5.应用KAPA全血试剂以及自配全血体系进行全血直接PCR，结合PCR-SSP方法进行HLA-B*1502和HLA-B*5801基因型测定；研究对比自配全血体系对于特殊全血样本的PCR效果及应用可能性。结果：1.采用PCR-SSP方法检测本组58例基因组DNA样本结果：检出HLA-B*1502阳性者9例；HLA-B*5801阳性者4例。其中4例卡马西平所致SJS患者均为HLA-B*1502型；4例卡马西平导致的单纯皮疹患者均不是HLA-B*1502型；50例未曾服用卡马西平和别嘌呤醇的患者中检出HLA-B*1502阳性者5例，HLA-B*5801阳性者4例。来自苏南地区的50例未曾服用卡马西平和别嘌呤醇的患者中，HLA-B*1502阳性样本占10%，HLA-B*5801阳性样本占8%。2.PCR-SBT法检测本组58例基因组DNA样本结果, HLA-B*1502阳性和HLA-B*5801阳性样本与PCR-SSP法结果完全一致。3.SNP位点Rs2844682和Rs3909184基因型与HLA-B*1502无相关性。4.应用KAPA全血试剂和自配全血体系结合PCR-SSP方法筛选检测HLA-B*1502基因型和HLA-B*5801基因型可行，结果与基因组PCR-SSP法完全一致；并且自配全血体系对于特殊血样的检测也完全可行。结论：我们采用基因组DNA结合PCR-SSP法、PCR-SBT法、相关SNP位点检测法以及全血体系结合PCR-SSP的方法来筛查检测HLA-B*1502和HLA-B*5801等位基因型，并比较其准确性、简便性以及成本等各方面问题。我们认为临床上可应用PCR-SSP法来筛查检测HLA-B*1502和HLA-B*5801等位基因型；应用全血试剂进行全血直接PCR结合PCR-SSP法则更简便、经济，减少了实验过程中的各种污染机会，其检测准确性更高。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 研究材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 英文缩写词表
• 攻读学位期间发表的论文、科研成果
• 附录
• 致谢