柴胡皂苷酶水解特性的研究

论文摘要

本文筛选柴胡皂苷糖苷酶生产菌为目标，主要研究真菌sp.c42、韩国庆熙大学校提供的细菌（Microbacterium sp.GS514-saiko）和韩国KAIST提供的新细菌（Rhodanobactersp.GS3054等四种菌）的发酵、所产生酶对柴胡皂苷以及人参皂苷和淫羊藿苷糖基水解性能。真菌sp.c42选用槐花为诱导物，28℃理想发酵培养5天，所产柴胡皂苷酶通过DEAE-Cellulose离子交换柱进行分离纯化，纯化后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验测得其为单带，分子量约为59KD，与上届研究生富瑶瑶59KD的结果基本相同。分子量约为59KD的酶（第16管）能水解柴胡皂苷糖基，分子量约为57KD（第21管）的酶水解人参二醇类皂苷（PPD）；最适反应温度均为40℃；最适pH均为5，三种金属离子Ca2+、Mg2+、Zn2+对PPD为底物时的酶反应基本没有影响，而以柴胡作为底物时Ca2+、Mg2+离子具有促进酶反应作用，Zn2+无促进作用。将细菌sp.GS514所产粗酶，能把Rb1转化为Rd、Rg3、Rh2；也能水解柴胡皂苷糖基。但是，其酶经DEAE-cellulose阴离子纤维素柱交换层析分离得到的酶，活力降低很大，只能人参皂苷Rb1转化为Rd，对0.2%柴胡皂苷只能水解10%；进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，有两条蛋白带，其分子量分别为67KD和59KD。说明它在保存及分离过程中酶活力降低,有待于进一步的研究。细菌sp.GS3054的发酵液对水解柴胡皂苷能力较低，但是浓缩到1/5时，其酶活力很高；有0.04％芦丁诱导物时产柴胡皂苷酶很高；而且，该菌也产淫羊藿苷酶；发酵条件为在25℃,发酵时间6天。对柴胡皂苷酶而言，真菌sp.c42似乎好于上述细菌；但是细菌sp.GS514所产的酶对人参皂苷PPD转化成Rg3和Rh2有意义；细菌Rhodanobacter sp.GS3054不仅对柴胡皂苷水解能力强，也能水解淫羊藿苷，有待于进一步探讨。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 柴胡的分类，来源
• 1.1.1 柴胡的形态、分布
• 1.1.2 柴胡的采收
• 1.2 柴胡的有效成分
• 1.2.1 柴胡皂苷
• 1.2.2 黄酮类
• 1.2.3 挥发油
• 1.2.4 多糖
• 1.2.5 木脂素类
• 1.2.6 香豆素类
• 1.2.7 甾醇类
• 1.2.8 金属元素
• 1.3 柴胡皂苷的分类和结构
• 1.4 柴胡皂苷的药理作用
• 1.4.1 粗皂苷的药理作用
• 1.4.2 柴胡皂苷 A（SSA）、柴胡皂苷 D（SSD）的药理作用
• 1.4.2.1 抗炎作用
• 1.4.2.2 免疫调节作用
• 1.4.2.3 抗肿瘤作用
• 1.4.2.4 抗肝纤维化作用
• 1.5 关于柴胡皂苷酶的研究进展
• 1.6 本论文的主要研究内容
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 菌种及酶液
• 2.1.2 试剂与仪器
• 2.1.3 培养基
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 发酵方法与酶液提取
• 2.2.2 酶活力测定
• 2.2.3 薄层层析法（TLC）
• 2.2.4 酶的分离提纯及分子量的测定
• 2.2.5 皂苷酶性质的研究
• 2.2.6 柴胡皂苷酶的酶反应特性的研究
• 2.2.7 SP.GS514 细菌产人参皂苷酶水解特性的研究
• 2.2.8 SP.GS3054 细菌所产柴胡皂苷酶的发酵条件研究
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 真菌所产柴胡皂苷酶酶分离提纯及酶性质的研究
• 3.1.1 粗酶液的制备及酶活力的检验
• 3.1.2 柴胡皂苷酶的分离纯化及分子量测定
• 3.1.3 柴胡皂苷酶水解特性的研究
• 3.2 细菌 MICROBACTERIUM SP.GS514-SAIKO 所产酶皂苷酶的研究
• 3.3 细菌 SP.GS3054 所产酶的研究
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢