草菇菌种质量控制技术研究

论文摘要

草菇的生物学效率约为20%,明显低于其他食用菌,而菌种是草菇生产中的重要生产资料之一,草菇菌种质量的好坏直接关系到出菇的产量与质量。本研究以屏优一号、V0023、V尤溪三个草菇菌株为材料,从菌种制作、菌种纯度、菌种活力三个方面进行研究,初步建立了一套草菇菌种质量控制技术。主要研究成果如下:1菌种制作以三个菌种为材料,研究了不同的草菇栽培种配方、含水量、酸碱度、培养温度、保藏时间对出菇产量的影响,结果表明:棉子壳85%、麸皮10%、过磷酸钙1%、石灰4%、含水量62%配方产量最高;草菇菌种的最适合含水量为59%-62%;草菇菌种最适合添加4%-6%石灰;培养温度为21℃-24℃草菇菌种生长速度缓慢,27℃-36℃菌种生长很快,但21℃- 36℃培养的草菇菌种出菇产量无差异;随着菌种保藏时间的增大,草菇产量严重下降。2菌种纯度以三个草菇菌株为材料,分别从细菌、病毒、霉菌三个方面检测。细菌检测中,向草菇正常菌种瓶中接种不同浓度的细菌,使之形成隐性污染,再采用平板划线法、液体培养法和煮沸-PCR法进行隐性污染检测和三种方法灵敏度检测,结果表明:三种方法均能用于草菇菌种隐性细菌污染检测;平板划线法和煮沸-PCR法检测的极限浓度为到104个/g菌种;液体培养法检测的极限浓度达到103个/g菌种。病毒的检测采用提取dsRNA技术并用酶解法验证,结果表明:阳性对照中能检测到dsRNA,而三株草菇经酶解均无条带,因此,三株草菇菌株均未感染病毒,dsRNA法能用于检测草菇菌种是否感染病毒。霉菌检测可采用平板法,此法的检测极限浓度为每克菌种中有100个孢子。3菌种活力通过制备不同保藏时间的草菇菌种,测定了几种与菌种老化相关的指标,结果表明:菌种的萌发速度、纤维素酶活性、多酚氧化酶活性、丙二醛含量、细胞核数目、有核细胞比例以及菌种总RNA提取结果与保藏时间及产量呈显著相关性,可以作为反映草菇菌种活力的指标;而淀粉酶活性、蛋白酶活性、木聚糖酶活性、pH值、酸性磷酸酶活性、过氧化物酶活性和超氧化物歧化酶活性与保藏时间及产量无显著相关性,不能作为反映草菇菌种活力的指标。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一章 文献综述
• 1 草菇概述
• 2 食用菌菌种质量评价
• 3 优质菌种生产技术研究
• 4 菌种纯度及其检验方法研究
• 4.1 细菌污染及其检验方法研究
• 4.2 病毒侵染及其检验方法研究
• 4.3 霉菌污染及其检验方法研究
• 5 菌种活力及其检测指标研究
• 5.1 菌种活力与菌丝生长状况关系研究
• 5.2 菌种活力与生理生化活性的关系研究
• 5.3 菌种活力与其他因素的关系研究
• 第二章 菌种生产技术研究
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 仪器
• 1.4 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 不同栽培料配方的菌种对草菇产量的影响
• 2.2 不同栽培料含水量的菌种对草菇产量的影响
• 2.3 不同栽培料酸碱度的菌种对草菇产量的影响
• 2.4 不同培养温度的菌种对草菇产量的影响
• 2.5 不同保藏时间的菌种对草菇产量的影响
• 3 讨论与小结
• 第三章 菌种纯度检测技术研究
• 第一节 隐性细菌的检测
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 药品与试剂
• 1.4 仪器
• 1.5 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 菌种瓶细菌隐性污染的形成
• 2.2 平板划线法及其灵敏度检测结果
• 2.3 液体培养法及其灵敏度检测结果
• 2.4 煮沸-PCR 法及其灵敏度检测结果
• 3 讨论与小结
• 第二节 病毒的检测
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 药品与试剂
• 1.4 仪器
• 1.5 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 疑似dsRNA 病毒提取物电泳结果
• 2.2 疑似dsRNA 病毒提取物的酶解结果
• 3 讨论与小结
• 第三节 霉菌污染的检测
• 1 材料与方法
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 仪器
• 1.4 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 霉菌污染的菌种瓶
• 2.2 菌种霉菌污染的检测结果
• 2.3 霉菌孢子平板法灵敏度检测
• 3 讨论与小结
• 第四章 菌种活力检测指标研究
• 1 实验材料
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 药品与试剂
• 1.4 设备
• 1.5 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 不同保藏时间的菌种萌发后的菌落形态观察和萌发速度测定
• 2.2 不同保藏时间菌种的生理生化指标测定结果
• 2.2.1 淀粉酶活性测定结果
• 2.2.2 纤维素活性测定结果
• 2.2.3 蛋白酶活性测定结果
• 2.2.4 木聚糖酶活性测定结果
• 2.2.5 酸性磷酸酶活性测定结果
• 2.2.6 多酚氧化酶活性测定结果
• 2.2.7 过氧化物酶活性测定结果
• 2.2.8 超氧化物歧化酶活性测定结果
• 2.2.9 丙二醛含量测定结果
• 2.2.10 pH 值测定结果
• 2.3 不同保藏时间菌种的细胞核荧光染色观察
• 2.3.1 不同保藏时间菌种的细胞核数目统计
• 2.3.2 不同保藏时间菌种有核细胞的比例统计
• 2.4 不同保藏时间菌种的总RNA 提取
• 2.4.1 不同方法提取草菇栽培料菌种总RNA
• 2.4.2 不同保藏时间菌种的总RNA 提取结果
• 2.5 菌种活力指标与产量相关性分析
• 3 讨论与小结
• 参考文献
• 附录1：不同栽培料配方菌种瓶图片
• 附录2：不同培养温度菌种瓶图片
• 附录3：不同栽培料含水量菌种瓶图片
• 附录4：不同栽培料酸碱度菌种瓶图片
• 附录5：不同保藏时间菌种瓶图片
• 附录6：不同保藏时间菌种萌发后生长管图片
• 致谢