论文摘要
一、研究背景 干细胞（stem cells）是一类不分化而长期生存且保持多种分化潜能的细胞群,而祖细胞（progenitor cells）是一类分化能力、自我更新、自我维持能力受限制,只有单向或双向分化潜能且生存时间相对较短的细胞群。目前认为肝干细胞是体内存在的一种具有自我增殖能力和多向分化潜能的干细胞,可以分化为肝细胞和胆管上皮细胞等多种细胞,大量研究证实成体肝脏内存在肝干细胞,卵圆细胞作为一种祖细胞可分化为肝细胞和胆管上皮细胞[1-2],它在肝损伤时积极参与肝组织的修复,但对干细胞的研究还是经体内实验为主,没有成熟的体外分离培养肝干细胞的方法,而建立肝干细胞体外分离培养方法和细胞模型,对其深入研究至关重要,也将为肝脏发生及其相关医学问题的探讨提供一个理想的研究平台。目前肝干细胞成了国内外研究的热点。二、目的 本研究拟通过全骨髓培养法体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞（rat bone marrowmesenchymal stem cells,rBMMSCs）,并使用诱导剂诱导其向肝干细胞（hepatic stem cells,HSCs）分化,探讨体外诱导骨髓间充质干细胞定向分化为肝干细胞的可行性。三、方法和结果 方法:无菌条件下取出大鼠双侧股骨及胫骨,冲洗骨髓腔获得细胞,采用全骨髓培养法体外培养细胞,贴壁筛选纯化rBMMSCs并进行体外培养、扩增,设实验组及对照组,应用肝细胞生长因子（HGF）诱导分化,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,免疫组化检测CK18、CK19及波形蛋白Vimentin;ELISA等方法检测甲胎蛋白,白蛋白及碱性磷酸酶。 结果 rBMMSCs经体外培养诱导后4天呈多角形改变、10天左右呈卵圆形改变。当细胞出现卵圆形改变后进行免疫组化及ELISA检测,结果显示ALB,AFP,CK18、CK19表达阳性,ALP出现明显改变 四、结论1.全骨髓培养法是一种简便、减少细胞污染,能有效分离培养MSCs的培养方法。2.HGF在体外诱导MSCs向HGC分化过程中起到关键性的作用。3.MSCs具有多能分化特性,体外培养的rBMMSCs在HGF诱导下具有向HGC横向分化的能
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