论文摘要
第一部分VPO1水平与肺动脉高压的相关性目的：肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension, PAH）是一类以肺动脉压力升高为特征的临床疾病,大量研究证实,氧化应激与PAH的发生发展密切相关。PAH发病时存在氧化和抗氧化系统调节紊乱,导致活性氧（reactive oxygen species, ROS）增多和/或抗氧化能力降低,使得ROS通过多种途径介导组织及细胞损伤。血管过氧化物酶（vascular peroxidase, VPO）是新发现的含血红素的过氧化物酶家族成员,可催化H202（弱氧化剂）生成HOC1（强氧化剂）增强氧化应激效应,在血管组织中的表达以VPO1为主。基于氧化应激在PAH发生发展过程中的重要作用及VPO1促氧化应激作用,本研究旨在整体水平初步探讨VPO1与肺动脉高压的相关性。方法：共纳入59名PAH患者及43名健康体检者,所有PAH患者均完善右心导管及其他相关检查,采用Western Blot方法检测血清中VPO1水平。比较两组之间血清VPO1水平变化。结果：PAH患者血清VPO1浓度为127.46±7.47ng/ml,显著高于健康对照组（89.94±7.91ng/μ1, p<0.01）,总人群中血清VPO1的浓度分布范围为12.75～397.74ng/μ1。结论：血清VPO1水平与肺动脉高压发生发展可能相关。第二部分VPO1介导氧化应激诱导肺动脉平滑肌细胞增殖目的：肺动脉平滑肌细胞增殖导致的肺血管重构是PAH发生发展的重要机制之一。研究表明氧化应激与肺动脉平滑肌细胞增殖密切相关。基于VPO1可以通过催化H202生成HOC1并增强氧化应激效应的能力,本研究拟在原代肺动脉平滑肌细胞结合工具药和基因沉默技术,通过检测细胞增殖指标、VPO1表达、H202及HOC1水平,确证VPO1介导氧化应激促肺动脉血管平滑肌细胞增殖作用及其机制。方法：提取原代大鼠肺动脉平滑肌细胞,予以低氧处理（3%O2,5%CO2,92%N2,37℃,24h）;以BrdU参入法检测肺动脉平滑肌细胞的增殖指标；以Western Blot法检测细胞中VPO1、id1等蛋白的表达；以Real-timePCR法检测细胞中VPO1、 id1等mRNA含量；以ELISA法检测细胞培养液中H2O2的含量；利用Nox特异性抑制剂DPI、H2O2特异性水解酶（catalase）及VPO1抑制剂ABAH等工具药初步确定Nox/H2O2/HOC1/id1信号途径,在此基础上,以siRNA沉默肺动脉平滑肌细胞中VPO1表达,观察其对低氧所致细胞增殖的影响。结果：（1）低氧处理（3%O2）能显著诱导肺动脉平滑肌细胞增殖；预先予以DPI、Catalase、ABAH能抑制低氧处理的诱导增殖效应。（2）低氧处理（3%O2）能显著诱导肺动脉平滑肌细胞VPO1、idl蛋白及mRNA水平,能显著提高细胞培养液中H2O2及细胞中HOC1水平。预先予以DPI、Catalase、ABAH能削弱低氧处理后细胞VPO1、id1蛋白及mRNA、细胞培养液中H2O2及HOC1水平的改变。（3）利用siRNA技术能成功抑制原代肺动脉平滑肌细胞中VPO1表达水平；沉默原代肺动脉平滑肌细胞中VPO1能显著抑制低氧处理（3%02）诱导的细胞增殖效应及降低细胞中id1蛋白及mRNA、细胞培养液中HOC1水平。结论：低氧处理可上调VPO1表达水平,VPO1可通过介导Nox/H2O2/VPO1/HOC1/idl氧化应激信号通路诱导平滑肌细胞增殖。
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标签：肺动脉高压论文; 血管过氧化物酶论文; 氧化应激论文; 原代肺动脉平滑肌细胞论文; 细胞增殖论文;