健骨方对兔膝骨关节炎软骨的影响及治疗膝骨关节炎的临床观察

论文摘要

目的:观察健骨方对膝骨关节炎模型兔的关节软骨形态学与组织学改变、软骨细胞分泌基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、特异性组织基质金属蛋白酶抑制因子（TIMP-1）、白细胞介素-1β（IL-1β）的作用及对软骨细胞凋亡指数（AI）与增殖指数（PI）的不同影响;健骨方治疗膝骨关节炎的临床疗效观察,为探讨中药疗效的作用机制及临床用药提供依据。方法:实验研究:将35只新西兰兔随机分7组,正常对照组,模型对照组,补肾组,活血化瘀组,清热利湿组,祛风胜湿组,补肾活血解毒组,前两组给予生理盐水,后五组分别给予左归丸,失笑散,四妙散,豨桐丸,健骨方。饲养8周后大体观察关节结构一般表现,光镜下观察形态学变化并检测软骨、滑膜中MMP-1、MMP-3、TIMP-1、IL-1β的表达阳性情况,MMP-3、TIMP-1平均灰度的检测,软骨细胞的凋亡指数和增殖指数。临床观察:将60例膝骨关节炎患者随机分为试验组和对照组,试验组30例服用健骨方,对照组30例服用硫酸氨基葡萄糖,两组疗程均为6个月。结果:实验研究:光镜下观察形态学变化:据Mankin’s评分标准,对光镜下关节软骨及滑膜的退变程度评分,模型对照组评分明显高于正常对照组（P<0.05）,表明建模成功;健骨方组、失笑散组、豨桐丸组、四妙散组、左归丸组评分分别与模型对照组比较均有降低（P<0.05）,表明以上各组可以通过降低评分来改善软骨病变;健骨方组评分分别与其他各中药组比较均有降低（P<0.05）,表明健骨方组在降低评分改善软骨病变方面优于其他各中药组。光镜下观察组织学变化:左归丸组,失笑散组,四妙散组,豨桐丸组、健骨方组中关节软骨、滑膜中MMP-1、MMP-3、IL-1β阳性表达较模型对照组均降低,健骨方组降低较为明显;左归丸组,失笑散组,四妙散组,豨桐丸组、健骨方组中关节软骨、滑膜中TIMP-1阳性表达较模型对照组均有升高,健骨方组升高较为明显。软骨、滑膜中MMP-3平均灰度方面:模型对照组与正常对照组比较均数增高（P<0.05）,表明建模成功;健骨方组、左归丸组、四妙散组、失笑散组、豨桐丸组分别与模型对照组比较均数降低（P<0.05）,表明以上各组可以通过降低软骨细胞中MMP-3平均灰度来改善软骨病变;健骨方组分别与其他各中药组比较均数降低（P<0.05）,表明健骨方组在降低软骨细胞中MMP-3平均灰度方面优于其他各中药组。软骨、滑膜中TIMP-1平均灰度方面:模型对照组与正常对照组比较均数增高（P<0.05）,表明建模成功;健骨方组、左归丸组、四妙散组、失笑散组、豨桐丸组与模型对照组比较均数增高（P<0.05）,表明以上各组可以通过增高软骨细胞中TIMP-1而改善软骨病变;健骨方组与其他各中药组比较均数增高（P<0.05）,说明健骨方组在增高软骨细胞中TIMP-1平均灰度方面优于其他各中药组。软骨细胞的增殖指数方面:模型对照组与正常对照组比较均数降低（P<0.05）,表明建模成功;健骨方组与模型对照组比较均数增高（P<0.05）,表明健骨方可以通过刺激软骨细胞的增值而改善软骨病变;其他各中药组分别与模型对照组比较均数增高,但差异无统计学意义（P>0.05）。软骨细胞的凋亡指数方面:模型对照组与正常对照组比较均数增高（P<0.05）,表明建模成功;健骨方组、失笑散组、豨桐丸组与模型对照组比较均数均有降低（P<0.05）,表明以上各组可以降低软骨细胞凋亡指数来改善软骨病变;四妙散组、左归丸组与模型对照组比较均数降低,但差异无统计学意义（p>0.05）;健骨方组分别与其他各中药组比较均数降低（P<0.05）,表明健骨方组在降低软骨细胞凋亡指数方面明显优于其他各中药组。临床观察:治疗后,中医症候积分和病情轻重方面,试验组与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）,说明试验组在改善中医症候和病情轻重方面优于对照组;降低C反应蛋白（CRP）方面,两组组内比较,差异有统计学意义（P<0.05）,组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）,说明在降低CRP方面两组疗效现当。结论:实验研究显示健骨方能改善软骨及滑膜的退变程度计分,有效的降低关节软骨MMP-1、MMP-3、TIMP-1、IL-1β阳性表达和MMP-3平均灰度,降低软骨细胞的凋亡指数,升高软骨细胞的增殖指数和TIMP-1平均灰度来改善软骨病变,其具体作用机理有待于进一步探讨;临床观察显示健骨方治疗膝骨关节炎患者疗效肯定,并可以有效降低CRP。

论文目录

• 提要
• Abstract
• 引言
• 实验研究
• 一、材料
• （一） 动物
• （二） 药物
• （三） 主要试剂
• （四） 主要仪器
• 二、方法
• （一） 造模方法
• （二） 实验分组
• （三） 观察指标
• 三、结果
• （一） 大体观察
• （二） 光镜下观察形态学变化
• （三） 光镜下观察组织学变化
• （四） 免疫组化法检测滑膜软骨 MMP-1、MMP-3、TIMP-1、IL-1β水平
• （五） PCNA 法检测软骨细胞增殖指数
• （六） TUNEL 检测软骨细胞凋亡指数
• 临床观察
• 一、临床资料
• （一） 一般资料
• （二） 纳入病例标准
• 二、治疗方法
• （一） 试验组
• （二） 对照组
• 三、参照《中药新药临床技术研究指导原则》进行疗效评价
• 四、观察指标
• （一） 治疗前后病情轻重及中医症候积分变化的比较
• （二） 实验室观测指标
• （三） 不良反应的观察
• 五、结果
• （一） 治疗后两组组内病情轻重比较
• （二） 治疗后两组病情轻重比较
• （三） 治疗后两组中医症候积分疗效比较
• （四） 检测指标CRP
• （五） 安全检测结果
• 讨论
• 一、中医对膝骨关节炎的认识
• （一） 对病名的描述
• （二） 对病因病机的认识
• 二、组方依据
• （一） 治则治法
• （二） 药物组成
• （三） 选药分析
• （四） 配伍特点
• （五） 现代药理研究
• 三、现代医学对膝骨关节炎的认识
• （一） 细胞凋亡与膝骨关节炎
• （二） 细胞增殖与膝骨关节炎
• （三） bcl-2 mRNA、bax mRNA 表达与膝骨关节炎
• （四） 软骨细胞 MMP-3/TIMP-1 比值与膝骨关节炎
• （五） 细胞因子 IL-1β与膝骨关节炎
• 结语
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 详细摘要