阿魏酸钠对博莱霉素所致的大鼠肺纤维化干预作用的实验研究

论文摘要

目的:肺纤维化是以弥漫性、进行性肺间质纤维增生和肺泡结构紊乱并最终导致肺功能障碍为特点的疾病,是多种肺部疾病发展到晚期的共同结局。其病因各异,发病机制也不完全清楚,仍没有令人满意的治疗方法。临床上仍以糖皮质激素和细胞毒性药物为主,但疗效不确切,且副作用明显。因此,寻找治疗肺纤维化安全有效方法是当前迫切需要解决的问题。目前探索能够有效调节关键性细胞因子的活性,使细胞外基质（ECM）沉积与降解趋于平衡的药物已经成为抗纤维化研究的方向之一。本实验的目的是应用阿魏酸钠干预博莱霉素（BLM）诱导的大鼠肺纤维化模型,观察干预前后不同时间点肺泡炎、肺纤维化程度以及肺组织TGF-β1、TIMP-1和ET-1、SOD的表达及含量变化,探讨阿魏酸钠对实验性大鼠肺纤维化的保护作用及其可能的相关机制,为临床治疗提供新的思路。方法: 42只SD清洁级雄性大鼠,随机分为正常对照组（A组）6只、BLM模型组（B组）18只和阿魏酸钠干预组（C组）18只三组。模型组和干预组又各分为7天、14天和28天三个时间点组。模型组和干预组采用经一次性气管内注入BLMA5诱导大鼠肺纤维化模型,正常对照组在相同条件下给予等量的生理盐水气管内滴注。干预组造模后第二天给予阿魏酸钠35mg/kg灌胃。模型组和干预组于造模后7天（B7组和C7组）、14天（B14组和C14组）和28天（B28组和C28组）随机处死6只。对照组于14天时处死。取右肺组织,用多聚甲醛溶液固定、常规石蜡包埋、切片,分别应用HE染色和Masson染色,观察肺泡炎和肺纤维化的动态变化,并进行Szapiel病理分级;用免疫组化检测技术观察各组大鼠TGF-β1、TIMP-1表达的变化。左肺组织匀浆后用于检测内皮素-1（ET-1）、羟脯氨酸（HYP）的含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果: 1.肺组织中HYP的含量（μg/mg）:B7组和C7组HYP含量分别为（1.264±0.13）和（1.291±0.15）与A组（1.154±0.11）两两比较差异均无显著性（P>0.05）;B14组（1.925±0.22）、B28组（2.546±0.15）较A组均明显升高（P<0.01）;C14组HYP含量为（1.736±0.21）、C28组为（1.889±0.16）,显著低于相应的BLM组（P<0.01）,但仍较A组明显升高（P<0.05）。2.肺组织SOD的活力（U/mgprot）:B7组SOD活力（44.54±5.77）较A组（76.72±4.87）显著降低（P<0.01）;之后活力有所回升,B14组SOD活力为（57.73±4.04）仍显著低于A组（P<0.01）,B28组（72.24±3.06）与A组无显著差异（P>0.05）。C7组SOD活力（58.10±4.91）较B7明显升高（P<0.01）,但活力仍较A组明显降低（P<0.01）。C14组（63.09±4.95）较B14组有所增高,但两者差异无显著性（P>0.05）;C28组（72.17±3.71）仍维持于较高水平,与B28、A组均无显著差异（P>0.05）。4.肺组织ET-1的含量（pg/mg prot）: B7组为（317.988±20.95）较A组（123.673±16.67）显著增高（P<0.01）;之后随病程进一步增高,B14组ET-1含量（358.992±24.98）达高峰,后略有下降, B28天组（274.414±27.28）仍显著高于A组（P<0.01）。C组中C7组（172.663±18.29）较B7组明显降低（P<0.01）,但仍显著高于A组（P<0.01）。C14组（239.585±29.16）较B14组亦有明显降低（P<0.01）,但较A组仍明显升高（P<0.01）;C28组（237.973±24.91）与B28组比较显著降低（P<0.05）,仍显著高于A组（P<0.01）。5.病理结果:B组大鼠表现出肺泡炎和纤维化的病理过程,证明造模成功。C组大鼠肺泡炎和肺纤维化的程度均较B组减轻,将肺泡炎和肺纤维化程度分级后进行统计学分析,C7、C14组肺泡炎程度较B7、B14组显著减轻（P<0.05）,C28组肺纤维化程度较B28组显著减轻（P<0.05）。6.肺组织中TGF-β1表达的变化:免疫组化结果显示,A组在少数支气管粘膜上皮细胞、肺泡上皮细胞和血管内皮细胞处弱阳性表达。B组,除在上述细胞表达增强外,在增厚的肺泡间隔及肺实变区出现大量的强阳性表达,巨噬细胞、成纤维样细胞强表达。C组阳性表达的部位与B组相似,但阳性表达的面积明显减少,强度也明显减弱。半定量分析结果: B7组（4.57±0.46）表达明显高于A（1.75±0.59）组（P<0.01）,之后逐渐增高,B14组（6.20±0.36）达高峰,以后表达有所减低, B28组为（3.68±0.44）,较A组仍显著增高（P<0.01）。经干预后,C组表达较B组减低,其中C7（3.82±0.26）、C14组（5.37±0.55）较相应的B7、B14组显著降低（P<0.05）,仍明显高于A组（P<0.01）。C28组（3.32±0.29）与B28组无显著差异（P>0.05）。7.肺组织中TIMP-1表达的变化:A组只在少数肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、间质巨噬细胞,弱阳性表达。B组中除上述细胞表达明显增强外,成纤维细胞灶、巨噬细胞及肺实变区内均有强表达。C组各时段阳性表达部位与B组相同,阳性表达范围及表达强度均低于B组。半定量分析结果:B7组（2.67±0.40）表达高于A组（2.18±0.48）,但差异无显著性（P>0.05）,B14组（5.10±0.40）表达逐渐增高,显著高于A组（P<0.01）,至B28组（6.18±0.34）达高峰。经干预后,C组表达较B组减低,其中C28组（5.38±0.43）较B28组显著降低（P<0.05）,仍显著高于A组（P<0.01）,C7（2.65±0.35）、C14组（4.58±0.39）虽然较相应的B7、B14组表达有所降低,但差异无显著性（P>0.05）。结论: 1.在BLM所致大鼠肺纤维化过程中,肺组织SOD活性下降,ET-1含量增高,以及肺组织内TGF-β1、TIMP-1的表达增高;2.早期应用阿魏酸钠能够减轻BLM所致的肺纤维化大鼠肺泡炎及纤维化的程度,可以下调BLM诱发的大鼠肺纤维化过程中肺组织TGF-β1和TIMP-1的表达,ET-1含量,并使SOD活性升高。3.阿魏酸钠减轻BLM诱发的大鼠肺纤维化,可能与其抗氧化、拮抗ET-1生物学作用,并且下调TGF-β1和TIMP-1的表达有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 阿魏酸钠对博莱霉素所致的大鼠肺纤维化干预作用的实验研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 TGF-β1、Smad 信号传导通路与肺纤维化
• 致谢
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