EGCG改善应激性神经损伤的信号转导机制研究

论文摘要

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯[（-）-epigallocatechin gallate,EGCG]干预对应激动物行为学表现的影响,并探讨其对中枢神经系统蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）、细胞外信号蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2）、磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（serine/threonine kinase,AKT）和信号转导与转录激活因子（janus kinase-signal transducer and activator of transcription,JAK-STAT）等信号转导通路的作用,以阐明EGCG改善应激性神经损伤的分子机制。方法健康雄性Wistar大鼠随机分为4组:正常对照（CT）组、束缚应激（ST）组、绿茶多酚（green tea polyphenols,GTPs）干预应激（GST）组、EGCG干预应激（EST）组。以束缚制动的方法建立应激动物模型,GTPs和EGCG以灌胃方式给予,干预剂量为500mg/kg.bw.d,实验周期30d。通过旷场实验及避暗实验检测大鼠的认知行为和学习记忆能力;分别以放免法、双抗夹心ELISA法检测血浆中皮质醇、神经递质的含量。以免疫印迹（Western blot,WB）检测大鼠海马及皮质中PKC、ERK1/2、AKT（Thr308）和STAT3蛋白表达的变化及其磷酸化情况。以实时荧光定量PCR检测海马及皮质中这4类信号蛋白mRNA水平的变化。结果1、与CT组相比,ST组在旷场中的潜伏期延长,穿格数明显减少（P<0.05）;GST组和EST组与ST组相比有显著性差别（P<0.05）。避暗实验显示,与CT组相比,ST组潜伏期显著降低,电击次数出现明显增加（P<0.05）,而GST组与EST组潜伏期比ST组显著增长,电击次数显著降低（P<0.05）。此外,ST组血浆皮质醇水平明显增加,多巴胺和5-羟色胺水平降低（P<0.05）;而GST组与EST组与ST组相比,皮质醇水平降低,多巴胺及5-羟色胺含量升高（P<0.05）;而且动物的行为表现与血浆皮质醇和神经递质含量之间存在相关关系。2、各组间PKC、ERK1/2、AKT和STAT3总蛋白水平未有显著差异。与CT组相比,ST组海马组织中4类信号蛋白的磷酸化水平均显著降低（P<0.05）而GST组和EST组与ST组相比则明显提高（P<0.05）;ST组皮质中只有p-ERK1/2和p-STAT3的表达量显著低于CT组（P<0.05）,在GST组和EST组的表达则显著增加（P<0.05）,而皮质中p-PKC和p-AKT的变化在各组之间无显著性差异。3、与CT组相比,ST组海马组织中4类信号蛋白的mRNA含量均显著降低（P<0.05）,而GST及EST组的表达则较ST组显著增加（P<0.05）。ST组皮质中相关信号蛋白mRNA的表达与蛋白的磷酸化水平变化类似,只有ERX1/2和STAT3 mRNA水平显著低于CT组,GST组和EST组则较ST组明显增加（P<0.05）。结论1、慢性束缚应激可引起机体的行为学表现异常,而适量补充GTPs和EGCG可改善应激大鼠的行为表现,提高应激机体的自主活动和探究行为以及学习记忆能力。2、EGCG可对不同信号蛋白PKC、ERK1/2、AKT、STAT3的磷酸化水平及其mRNA表达产生调节作用,这提示相关的信号转导通路参与了 EGCG对应激性神经损伤的保护作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、EGCG对应激大鼠行为学表现的影响
• 1.1 对象和方法
• 1.1.1 实验对象及分组
• 1.1.2 主要仪器及试剂
• 1.1.3 实验方法
• 1.1.4 数据分析处理
• 1.2 结果
• 1.2.1 各组大鼠体重的变化
• 1.2.2 各组大鼠行为学的表现
• 1.2.3 大鼠血浆中皮质醇含量的改变
• 1.2.4 大鼠血浆中多巴胺和5-羟色胺含量的改变
• 1.2.5 大鼠行为学指标与血浆皮质醇、多巴胺和5-羟色胺含量的相关分析
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 二、EGCG对应激大鼠海马及皮质中相关信号蛋白表达及其mRNA表达的影响
• 2.1 对象和方法
• 2.1.1 实验动物及分组
• 2.1.2 实验流程和样本采集
• 2.1.3 主要仪器
• 2.1.4 主要试剂
• 2.1.5 主要液体的配置
• 2.1.6 测定方法
• 2.1.7 数据分析处理
• 2.2 结果
• 2.2.1 EGCG对大鼠海马及皮质组织中PKC蛋白表达、磷酸化水平及其mRNA水平的影响
• 2.2.2 EGCG对应激大鼠海马及皮质组织中ERK1/2蛋白表达、磷酸化及其mRNA水平的影响
• 2.2.3 EGCG对应激大鼠海马及皮质组织中AKT（Thr308）蛋白表达、磷酸化及其mRNA水平的影响
• 2.2.4 EGCG对应激大鼠海马及皮质组织中STAT3蛋白表达、磷酸化及其mRNA水平的影响
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述 EGCG发挥神经保护的作用机制研究进展
• 综述参考文献
• 致谢