论文摘要
目的研究非诺贝特和吡格列酮对3T3-L1脂肪细胞和高脂饮食诱导SD肥胖大鼠vaspin mRNA和蛋白质表达的影响。方法（1）用MIX、DXM和胰岛素诱导前体脂肪细胞分化,8天后分化成熟。予非诺贝特（100μmol/L）和吡格列酮（100μmol/L）分别处理分化过程中3T3-L1脂肪细胞2d、4d、6d和8d,提取各时段细胞总RNA和蛋白质,留取细胞上清液。实验重复三次。（2）80只7周龄雄性SD大鼠随机分为普食组、高脂组、非诺贝特组和吡格列酮组,每组20只。普食组予普通饲料喂养,余三组予高脂饲料。12周肥胖大鼠形成模型后,非诺贝特组和吡格列酮组分别予非诺贝特30mg/kg·d、吡格列酮10mg/kg·d灌胃4周,余两组予相应溶剂灌胃,容积为2ml/kg·d。定期测体重,12周和16周时抽血备测FFA、TG、TC、FBG、FINS等指标,最后分离附睾周围全部脂肪并称重,收集附睾和皮下脂肪组织,提取蛋白质。（3）用半定量RT-PCR和western blot检测细胞、细胞上清液和脂肪组织、血清中vaspin的表达。结果（1）3T3-L1前体细胞及分化的各个阶段均表达vaspin mRNA和蛋白质,分化4d时vaspin mRNA表达量上升达高峰（P＜0.05）,6d、8d的3T3-L1细胞vaspin mRNA没有进一步增加,与4d表达量差异无统计学意义（P＞0.05）。但vaspin蛋白质表达量在整个细胞分化过程中差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）与对照组相比,非诺贝特作用分化过程中脂肪细胞2d、4d、6d、8d后,vaspin mRNA分别升高6.3%,19.2%,26.9%,33.9%;吡格列酮组升高5.1%,10.7%,16.5%,20.9%,与对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）。随分化时间延长,两组干预效应逐渐增强。且4d、6d及8d非诺贝特组3T3-L1细胞vaspin mRNA水平高于吡格列酮组（P＜0.05）。（3）与对照组相比,非诺贝特作用分化过程中脂肪细胞2d、4d、6d、8d后,vaspin蛋白质水平分别升高7.7%、20.8%、35.6%、56.5%;吡格列酮组升高5.5%,10.90%,20.3%,39.1%,与对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）。各组细胞上清液的vaspin蛋白质与对应脂肪细胞的表达量呈同步变化,且4d、6d及8d非诺贝特组3T3-L1细胞及上清vaspin蛋白质水平高于吡格列酮组（P＜0.05）。（4）与普食组大鼠相比,高脂组体重、Lee’s指数、附睾脂肪重量、TG、FFA、FBG、FINS均明显升高（P＜0.05）;与高脂组相比,非诺贝特和吡格列酮组大鼠TG、FFA、FINS均降低（P＜0.05）;同时非诺贝特组体重、Lee’s指数、附睾脂肪重量、FBG降低,而这些指标在吡格列酮与高脂组间差异均无统计学意义（P＞0.05）。TC各组间差异无统计学意义（P＞0.05）。（5）普食组大鼠附睾脂肪vaspin蛋白质表达量高于与皮下脂肪（P＜0.05）。高脂组大鼠附睾脂肪vaspin蛋白下降14.3%（P＜0.05）,皮下脂肪vaspin无明显变化（P＞0.05）。非诺贝特能促进附睾和皮下脂肪组织vaspin蛋白质表达,与普食组和高脂组间差异均有统计学意义（P＜0.05）。吡格列酮能增加附睾脂肪vaspin表达,但抑制皮下脂肪vaspin的表达,与普食组差异均有统计学意义（P＜0.05）。（6）血清中vaspin可检测到45kDa和90kDa两条带,与普食组相比,高脂组vaspin的45kDa+90kDa总量下降15.7%（P＜0.05）,非诺贝特和吡格列酮干预后vaspin总量升高,且与普食组差异无统计学意义（P＞0.05）。结论（1）vaspin mRNA在3T3-L1细胞诱导分化4天时表达量达高峰,蛋白质含量在分化的过程中没有明显增加。非诺贝特和吡格列酮可增加3T3-L1细胞vaspinmRNA表达,促进vaspin蛋白质的表达和分泌。（2）高脂饮食可诱导大鼠产生营养性肥胖,出现糖脂代谢紊乱。非诺贝特和吡格列酮可改善大鼠血脂和胰岛素抵抗,同时非诺贝特可降低大鼠体重。（3）高脂饮食大鼠附睾脂肪vaspin蛋白质和血清vaspin总量减少,非诺贝特和吡格列酮干预后可逆转。同时非诺贝特可增加皮下脂肪vaspin蛋白质的表达,但吡格列酮抑制其表达。血清中不同分子量vaspin的组成及功能有待进一步探讨。