半枝莲生物活性及相关化学成分研究

论文题目: 半枝莲生物活性及相关化学成分研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物化学与分子生物学

作者: 余建清

导师: 邹国林

关键词: 半枝莲,抗肿瘤,抗氧化,抗微生物,活性成分

文献来源: 武汉大学

发表年度: 2005

论文摘要: 半枝莲为唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don的干燥全草,分布在我国大部分地区,资源极其丰富。半枝莲有抗癌、抗炎、利尿等作用。但由于缺乏对半枝莲生物活性物质基础及其作用机制的研究,限制了半枝莲的开发利用。本课题从抗肿瘤、抗氧化及抗微生物活性方面对半枝莲的有效部位及有效成分进行了研究,为充分利用半枝莲资源,进行创新药物的研究和开发奠定基础。 1 抗肿瘤作用以对肿瘤细胞生长的抑制作用为初筛指标,对半枝莲的抗肿瘤有效部位进行了研究。将半枝莲乙醇提取物用不同极性溶剂萃取,分为5个部位。其中,氯仿萃取物（CE-SB）作用最明显,进一步研究了CE-SB的体内外抗肿瘤作用。采用了一系列检测细胞凋亡的方法研究了CE-SB诱导肝癌细胞Bel-7402的凋亡。结果显示,CE-SB可诱导Bel-7402细胞发生凋亡特征性的形态变化,如光镜下观察可见细胞逐渐变圆、细胞体积缩小等;通过Hoechst 33258对细胞核染色,可以看到染色质固缩、聚集,细胞核发生碎裂成为凋亡小体;提取DNA,进行琼脂糖凝胶电泳分析显示,经CE-SB处理过的细胞,形成凋亡特征性的DNA片段阶梯;流式细胞仪分析表明,经CE-SB处理过的细胞中出现G1/G0期前的亚二倍体峰（sub-G1峰）,即凋亡峰的出现,随着CE-SB的增加,凋亡率逐渐增加。对CE-SB处理过的Bel-7402细胞进行周期分析,结果表明,CE-SB对Bel-7402细胞S期影响较大,随着CE-SB浓度的增加,S期细胞数明显减小。以丝裂霉素为阳性对照药,在CE-SB与丝裂霉素对肿瘤细胞达到相同抑制

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第一章绪论

1 黄芩属植物化学成分及生物活性研究概况

1.1 黄芩属植物化学成分研究概况

1.1.1 黄酮类化合物

1.1.2 二萜类化合物

1.1.3 其它类化合物

1.2 黄芩属植物生物活性研究概况

1.2.1 抗氧化

1.2.2 抗肿瘤

1.2.3 抗菌

1.2.4 抗炎

1.2.5 抗病毒

2 具有抗肿瘤活性的天然化合物类型及其抗肿瘤机理的研究概况

2.1 抗肿瘤天然化合物主要类型

2.1.1 黄酮类化合物

2.1.2 生物碱

2.1.3 二萜类化合物

2.1.4 多糖

2.2 天然化合物抗肿瘤机理

2.2.1 诱导肿瘤细胞凋亡

2.2.2 抑制拓扑异构酶活性

2.2.3 抑制微管蛋白活性

2.2.4 抑制肿瘤血管形成

2.2.5 抑制酪氨酸激酶活性

2.2.6 抑制肿瘤细胞增殖，诱导其分化

2.2.7 逆转肿瘤细胞的多药耐药性

2.2.8 免疫增强作用

2.3 从植物中寻找抗肿瘤成分的方法和技术

2.3.1 抗肿瘤药筛选方法

2.3.2 活性成分分离的方法与技术

3 本课题研究内容及其意义

第二章半枝莲抗肿瘤有效部位的研究

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.2.1 细胞培养中使用试液的配制

1.2.2 半枝莲提取物的制备

1.2.3 细胞培养的方法

1.2.4 MTT法测定各提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用

2 结果

2.1 DMSO对肿瘤细胞生长的影响

2.2 半枝莲水煎煮物及乙醇提取物对肿瘤细胞增殖的影响

2.3 不同极性溶剂萃取物对肿瘤细胞增殖的影响

3 讨论

第三章半枝莲抗肿瘤有效部位的体内外抗肿瘤作用

1 材料与方法

1.1 材料及仪器

1.2 方法

1.2.1 供细胞实验用试液的配制

1.2.2 供动物实验用试液的配制

1.2.3 细胞培养

1.2.4 台盼蓝染色记数法

1.2.5 MTT比色法

1.2.6 流式细胞仪检测DNA含量

1.2.7 荧光显微镜观察细胞核的改变

1.2.8 琼脂糖凝胶电泳法

1.2.9 对小鼠S_(180)实体瘤生长的影响

1.2.10 对艾氏腹水瘤小鼠生存时间的影响

2 结果

2.1 CE-SB对肿瘤细胞及正常细胞生长的影响

2.2 流式细胞仪检测细胞出现DNA亚二倍体峰及细胞周期分析

2.3 细胞核形态的改变

2.4 CE-SB诱导Bel-7402细胞DNA片段化

2.5 CE-SB抑制S_(180)实体瘤的生长

2.6 CE-SB延长艾氏腹水瘤小鼠生存时间

3 讨论

第四章半枝莲抗肿瘤有效成分的研究

1 材料与方法

1.1 材料及仪器

1.2 方法

1.2.1 提取和分离

1.2.2 结构测定

1.2.3 抗肿瘤活性的测定

2 结果

2.1 结构解析

2.2 抗肿瘤作用

3 讨论

第五章半枝莲抗氧化作用的研究

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.2.1 提取物的制备

1.2.2 光照核黄素体系产生O_2~(.-)

1.2.3 总黄酮抗脂质过氧化的测定

2 结果

2.1 总黄酮提取及纯化的工艺

2.2 半枝莲不同极性溶剂提取物、野黄芩苷、印黄芩素及总黄酮对O_2~(.-)的清除作用

2.3 总黄酮对Xan-XO体系诱导红细胞膜脂质过氧化生成的影响

2.4 总黄酮对H_2O_2诱导红细胞膜脂质过氧化生成的影响

2.5 总黄酮对UV照射诱导红细胞膜脂质过氧化生成的影响

3 讨论

第六章半枝莲中主要黄酮化合物与蛋白质的相互作用

1 材料与方法

1.1 仪器及试药

1.2 方法

1.2.1 试液的配制

1.2.2 荧光光谱测定

1.2.3 吸收光谱测定

2 结果

2.1 野黄芩苷、印黄芩素对HSA及组蛋白H_1的猝灭光谱及猝灭机理

2.2 野黄芩苷、印黄芩素与HSA及组蛋白H_1的结合常数和结合位点数

2.3 野黄芩苷、印黄芩素在HSA上的结合位置

3 讨论

第七章半枝莲挥发油的生物活性及化学组成

1 材料与方法

1.1 材料及仪器

1.2 方法

1.2.1 挥发油的提取

1.2.2 抗菌活性的测定

1.2.3 MTT法测定挥发油对肿瘤细胞生长的影响

1.2.4 挥发油成分分析的条件

2 结果

2.1 半枝莲挥发油的抗菌作用

2.2 半枝莲挥发油抗肿瘤作用

2.3 挥发油的化学组成

3 讨论

第八章总结与展望

1 研究工作总结

1.1 研究的技术路线

1.2 研究结果

1.2.1 抗肿瘤作用

1.2.2 抗氧化作用

1.2.3 抗微生物作用

1.2.4 挥发油的成分分析

1.2.5 黄酮化合物与蛋白质的相互作用

1.3 本课题特色与创新

2 展望

参考文献

博士研究生期间已发表和待发表的论文

致谢

发布时间: 2006-03-27

参考文献

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[6].灵芝多糖对结肠癌细胞增殖抑制和凋亡的影响初步研究[D]. 梁曾恩妮.湖南农业大学2014
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