论文摘要
目的:肿瘤坏死因子受体1（tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1）是肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）的膜受体之一。TNFR1在人体内广泛分布于正常细胞膜表面,也存在于多种肿瘤细胞表面。TNFR1与配体TNF-α或TNF-β结合后,启动相关的信号通路,功能涉及到细胞的活化、增殖、凋亡及细胞毒活性等方面,但在不同的细胞,可以出现相反的结果,其作用机制目前尚不完全清楚。RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术是由与靶基因序列同源的双链RNA（double-stranded RNA,dsRNA）引发的普遍存在于生物体中的序列特异性基因转录后沉默过程,越来越广泛地应用于基础实验研究。本研究主要应用RNAi的实验方法,沉默食管癌细胞系EC109中TNFR1的表达,随后探讨对照组与实验组细胞增殖、凋亡等生物学行为的变化。材料和方法:1. EC109细胞用DMEM+F12培养基常规培养传代,RNAiso Reagent提取细胞总RNA,RT-PCR检测细胞中TNFR1在基因水平的表达。EC109细胞用DMEM+F12培养基常规培养传代,胰酶消化后收集贴壁生长的细胞,PBS清洗、离心、裂解,试剂盒分级提取可溶性亚细胞蛋白组分,所得膜蛋白进行Western Blot分析,检测EC109中TNFR1在蛋白水平的表达。2. EC109细胞用DMEM+F12培养基在六孔板内培养,在对转染条件进行优化后,对细胞进行转染,细胞分三组:空白对照组（未加转染试剂及siRNA）,阴性对照组（加入转染试剂及阴性对照siRNA）,实验组（加入转染试剂及TNFR1-siRNA）。RNAiso Reagent消化细胞后提取各组细胞总RNA,RT-PCR检验基因水平转染效果。试剂盒分级提取可溶性亚细胞蛋白组分,Western Blot技术检验蛋白水平转染效果。3.转染24小时后倒置相差显微镜观察细胞形态。4.将EC109细胞种于96孔板,对转染条件进行优化,细胞转染后用四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测转染前后细胞增殖能力的改变,绘制细胞生长曲线。5.收集转染后六孔板中各组细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡的变化情况。结果:1.由RT-PCR以及Western Blot等手段验证TNFR1在食管癌细胞系EC109中高表达。2.将TNFR1-siRNA转染进EC109细胞中,成功封闭了TNFR1的表达。3. RNAi处理后,三组细胞在形态上没有显示差别;RNAi处理后MTT检测结果显示,空白对照组和阴性对照组的细胞32小时内的细胞增殖没有差异（P>0.05）,实验组的细胞增殖加快（P<0.05）;RNAi处理后空白对照组和阴性对照组的细胞凋亡情况无差异（P>0.05）,实验组的细胞凋亡率降低（P<0.05）。结论:1. TNFR1在食管癌细胞系EC109中高表达。2.阻断TNFR1的表达使食管癌细胞的增殖、凋亡均发生变化,提示TNFR1在食管癌发生发展中发挥十分重要的作用。3.在食管癌细胞系EC109中,TNFR1主要发挥促进细胞凋亡的作用。
论文目录
相关论文文献
- [1].青藤碱调节EC109细胞增殖与凋亡的COX-2信号通路研究[J]. 中西医结合研究 2012(05)
- [2].尼妥珠单抗联合γ射线对人食管癌Ec109细胞生长的影响[J]. 中国辐射卫生 2011(03)
- [3].白藜芦醇联用紫杉醇对食管癌EC109细胞凋亡的影响[J]. 中医肿瘤学杂志 2020(03)
- [4].微囊藻毒素与甲基硝基亚硝基胍对食管癌EC109细胞株毒性的联合作用[J]. 环境与职业医学 2016(04)
- [5].5-氟脲嘧啶联合尼美舒利对人食管癌EC109细胞VEGF表达的研究[J]. 重庆医科大学学报 2010(10)
- [6].大蒜素干预下大鼠血清对食管癌EC109细胞增殖及凋亡的影响[J]. 中国煤炭工业医学杂志 2015(11)
- [7].顺铂下调铜离子转运蛋白1诱导人食管鳞癌细胞EC109耐药[J]. 南方医科大学学报 2011(05)
- [8].苦参碱对EC109肿瘤细胞增殖的影响[J]. 检验医学与临床 2012(02)
- [9].RNAi抑制食管癌EC109细胞株叶酸受体αmRNA表达的实验[J]. 广东医学 2009(04)
- [10].壁虎多肽混合物对人食管癌EC109细胞生长的抑制作用[J]. 中国临床药理学杂志 2013(08)
- [11].黄芩素对食管癌EC109细胞株增殖及细胞周期的影响[J]. 广东医学 2010(02)
- [12].miR-155对食管癌EC109细胞增殖和侵袭能力的影响[J]. 广东药科大学学报 2017(01)
- [13].人白介素21基因联合γ射线照射对食管癌EC109细胞周期的影响[J]. 中国辐射卫生 2011(01)
- [14].姜黄素作用PTEN/PI3K/AKT通路诱导食管癌EC109细胞凋亡[J]. 中国应用生理学杂志 2015(02)
- [15].姜黄素对食管癌Ec109细胞增殖和PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响[J]. 中国应用生理学杂志 2015(05)
- [16].DHEA联合γ射线对食管癌EC109细胞移植裸鼠的抑瘤与抗辐射作用[J]. 辐射研究与辐射工艺学报 2013(01)
- [17].苦参碱通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导食管癌Ec109细胞自噬[J]. 西安交通大学学报(医学版) 2020(03)
- [18].大蒜素与化疗药物对食管癌细胞EC109疗效比较的实验研究[J]. 中国病理生理杂志 2017(10)
- [19].细胞因子诱导杀伤细胞联合p38抑制剂对食管癌EC109细胞的作用[J]. 新乡医学院学报 2016(02)
- [20].沉默ABCE1基因对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2013(05)
- [21].塞来昔布对食管癌EC109细胞凋亡及机制的影响[J]. 广州医药 2020(01)
- [22].腺苷诱导人食管癌EC109细胞凋亡及其内质网分子机制[J]. 中国药理学与毒理学杂志 2011(06)
- [23].肿瘤转移抑制基因-1在食管鳞癌组织及食管癌EC109细胞中的表达及意义[J]. 西安交通大学学报(医学版) 2017(04)
- [24].番茄红素抑制食管癌细胞EC109增殖及其作用机制的研究[J]. 营养学报 2016(03)
- [25].PUMA在紫檀芪诱导食管癌EC109细胞凋亡中的作用[J]. 现代肿瘤医学 2015(06)
- [26].钒化钠对人食管癌细胞系EC109的增殖抑制作用与诱导凋亡作用[J]. 毒理学杂志 2018(01)
- [27].人食管鳞癌细胞系EC109中肿瘤干细胞的分离(富集)与鉴定[J]. 成都医学院学报 2012(03)
- [28].吲哚美辛诱导食管癌EC109细胞凋亡的Smac依赖性机制[J]. 现代肿瘤医学 2015(14)
- [29].大蒜素干预下SD大鼠血清对食管癌EC109细胞增殖活性的影响[J]. 临床和实验医学杂志 2015(19)
- [30].TRIM25泛素化IGF2BP3后抑制食管癌EC109细胞的活力[J]. 中国病理生理杂志 2020(01)
标签：食管癌论文;