论文摘要
背景:小口径人工血管移植术后出现内膜增生和血栓形成,导致通畅率不理想,主要是因为人工血管表面缺乏完整的内皮层。目前已经证实通过人工血管表面快速内皮化可以减少再狭窄的发生。人工血管内皮化的研究已经从种植内皮细胞进展到基因分子水平。血管内皮生长因子（VEGF）是诱导血管内皮细胞生长作用最强、特异性最高的一种生长因子。VEGF蛋白涂层和基因质粒转染都有其明显的缺陷。而腺病毒作为载体转染取得了很好的效果。目的:观察人工血管携带腺病毒介导的VEGF基因转染内皮细胞的效果、VEGF基因和蛋白的表达以及对内皮细胞生长的影响。材料和方法:1.ad5-EGFP转染EAhy926转染率的测定。2.人工血管携带腺病毒在静水中的释放情况。3.人工血管上内皮细胞的贴附情况。4.ad5-VEGF165-IRES-EGFP转染EAhy926,RT-PCR半定量检测VEGF基因水平表达。5.人工血管携带ad5-VEGF165-IRES-EGFP转染EAhy926,ELISA法检测VEGF蛋白水平表达。6.人工血管携带ad5-VEGF165-IRES-EGFP转染EAhy926,MTT法检测对内皮细胞生长的影响。结果:1.ad5转染率随MOI的增加而增加,MOI 200时达到87.3%。2.人工血管上消化下来发荧光的细胞在最初的1h内,下降最为明显。稀释液中基本没有发荧光的细胞。3.电镜显示内皮细胞贴附在人工血管上。4.ad5-VEGF165转染组RT-PCR有VEGF基因的表达,第3天比第1天表达强烈。对照组没有表达。5.ad5-VEGF165转染组上清液中有VEGF蛋白的表达,呈上升趋势第5天达峰后开始下降。对照组没有表达。6.ad5-VEGF165转染组OD值呈快速上升趋势,对照组上升缓慢。结论:1.ad5转染EAhy926的最适MOI为200。2.人工血管上携带的病毒静水中能在人工血管上保留1h左右,这是一个逐渐释放的过程,而不是瞬时释放。3.内皮细胞能够附着在人工血管上。4.ad5-VEGF165-IRES-EGFP能转染EAhy926,hVEGF165基因水平成功表达。5.人工血管携带ad5-VEGF165-IRES-EGFP能转染EAhy926,hVEGF165蛋白水平成功表达6.人工血管携带ad5-VEGF165-IRES-EGFP能促进内皮细胞的增殖。
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标签：人工血管论文; 血管内皮生长因子论文; 内皮细胞论文; 内皮化论文; 腺病毒论文;