高等植物胁迫信号网络突变体筛选及分析研究转HS1基因植株抗旱工程的初步研究

论文摘要

与激活序列1（as-1）同源的启动子元件广泛分布于植物防御相关基因和一些植物病原基因的启动子中，对防御相关基因的激活起着重要作用。as-1元件对多种胁迫刺激，如茉莉酸、水杨酸、过氧化氢、生物异源物质以及重金属，都有着强烈的应答，为筛选各种信号网络的交叉突变体提供一个独特的机会。单一的as-1顺式作用元件可以驱动其中的GUS报告基因的表达。我们构建了以GUS报告基因作背景的大规模T-DNA插入突变体库，并建立了有效的突变体高通量筛选方法，用此方法可以筛选出对不同胁迫信号发生不同应答的突变体。并且已经获得了一些对胁迫应答发生变化的突变体，这些突变体对我们从as-1信号传导途径中分离识别新成分很有帮助。我们筛选得到的一个T-DNA插入突变体，其T-DNA插入在基因At4g24275编码序列内，我们将其命名为D8L4，as-1元件可以调节该基因的表达，并且可以改变D8L4突变体中GUS报告基因的表达，但是如果启动子中缺乏as-1元件，则基因的表达就不会发生改变。At4g24275的RNAi转基因植物（8L4-RNAi）的表型也进一步验证了D8L4突变体，我们的研究结果表明用这种高通量筛选突变体的方法来筛选胁迫信号突变体是行之有效的。

论文目录

• 第一部分 高等植物胁迫信号网络突变体筛选及分析研究
• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 综述
• 材料和方法
• 一、实验材料
• 二、实验方法
• 1.拟南芥含GUS报告基因的pGPTV-HPT重组载体构建
• 2.拟南芥浸花转化
• 3.拟南芥转化体的筛选
• 4.拟南芥幼苗的GUS染色
• 5.pCB2004B/At4g24275的构建
• 6.农杆菌GV3101的电激转化
• 7.pCB2004A/At4g24275的构建
• 8.Northern blot分析
• 结果
• 1.构建了4×nos-1::uidA的报告基因拟南芥转基因株系用于突变体筛选
• 2.用化学方法和T-DNA插入构建突变体库
• 3.高通量突变体筛选方法的建立
• 4.筛选出对胁迫处理产生不同应答的两类主要突变体
• 5.T-DNA插入位点的鉴定
• 6.突变体株系△8L4的分析
• 7.A8L4的验证
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 转HS1基因植株抗旱工程的初步研究
• 中文摘要
• 英文摘要
• 综述
• 材料与方法
• 一、烟草叶片转化及植株再生
• （一） 实验材料
• （二） 实验方法
• 1.农杆菌介导的遗传转化
• 2.转化体的鉴定
• 3.转化体和对照株相关生物学指标的观察
• 4.转化体和对照光合指标的测定
• 5.转化体和对照耐盐性的观察
• 6.转基因HS1在转化体中的表达分析
• 结果
• 1.烟草叶片转化及植株再生
• 2.转化体的鉴定
• 3.转化体和对照相关生物学性状的观察
• 4.转化体和对照光合指标的测定
• 5.转化体和对照耐盐性的观察
• 6.转基因HS1在转化体中的表达分析
• 二、水稻胚性愈伤组织转化及植株再生
• （一） 实验材料
• （二） 实验方法
• 1.农杆菌介导的遗传转化
• 2.转基因植株的鉴定
• 3.转基因植株相关生物学指标的观察
• 4.转基因植株光合指标的测定
• 5.转基因HS1在转化体中的表达分析
• 结果
• 1.水稻胚性愈伤组织转化及植株再生
• 2.转基因植株的鉴定
• 3.转基因植株相关生物学指标的观察
• 4.转基因植株光合指标的测定
• 5.转基因HS1在转化体中的表达分析
• 讨论
• 参考文献
• 附录Ⅰ 培养基配方
• 附录Ⅱ X-Gluc染液
• 附录Ⅲ Northern blot
• 附录Ⅳ Hoagland营养液
• 附录Ⅴ 质粒图谱
• 致谢
• 发表的论文