中药血竭的质量控制研究

论文摘要

血竭是珍贵的中药传统品种之一,在我国药用历史已经有一千五百多年。进口血竭为棕榈科黄藤属植物Daemonorops draco Bl.的树脂,市价昂贵。我国用来代替进口血竭的药用资源,为百合科龙血树属剑叶龙血树（Dracaena cochinchinensis （Lour.）S. C. Chen）的含脂木质部提取的树脂,1999年定名为“龙血竭”。进口血竭与国产血竭有着相似的外表与药效,但在价格方面却有着相当大的差异,故需建立稳定可靠的分析方法达到质量控制的目的。本课题的研究方向是,中药血竭的质量控制研究。以中药血竭为研究对象,采用高效液相色谱法与微乳毛细管电动色谱法对血竭的指纹图谱进行了初步的研究,同时,建立了快速鉴别进口血竭与国产血竭的方法。课题的研究内容主要包括以下三个部分:1.毛细管电泳法用于进口血竭与国产血竭的快速鉴别;2.国产血竭的高效液相色谱指纹图谱研究;3.国产血竭的微乳毛细管电动色谱指纹图谱研究。首先,本文采用毛细管电泳-电化学检测（CE-ED）的方法达到了进口血竭与国产血竭快速鉴别的目的,同时用此方法测定了有效成分的含量。研究运行缓冲溶液浓度和酸度、分离电压、进样时间及检测电位等电泳条件对龙血素A、龙血素B和血竭素分离效果的影响。得到了最佳电泳条件:电极电位0.90 V（vs. SCE）、分离电压14 kV、电动进样8 s、运行缓冲液20 mmol/L（pH=9.24）硼砂溶液。在此优化条件下,龙血素A、龙血素B和血竭素得到很好的分离。在5×10-6-1×10-4 g/mL的范围内存在良好的线性关系,方法检测限低,回收率测定结果说明该法准确、可靠。其次,本文采用高效液相色谱法（HPLC）建立了不同产地国产血竭药材的指纹图谱。研究了流动相类型、梯度洗脱条件及检测波长的选择对国产血竭药材指纹图谱的影响,得到了优化的分析条件:色谱柱,Lichrospher C18 （250 mm×4.6 mm内径, 5μm）;流动相,乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）梯度洗脱,0-90 min,A :30%-60%;流速为0.6 mL/min;检测波长:280 nm。以4种样品色谱图中20个共有峰平均相对峰高为标准建立对照指纹图谱,采用夹角余弦和相关系数的方法计算4种国产血竭样品HPLC色谱图相似度,结果均大于0.91,表明所有样品的质量一致。该方法准确、可靠,还可用于进口血竭与国产血竭的鉴别。最后,本文采用微乳毛细管电动色谱（MEECK）方法建立不同产地国产血竭药材的指纹图谱。实验条件为:Beckman P/ACEMDQ型毛细管电泳仪;熔融石英毛细管,66 cm×75μm;运行电压,18 kV;检测波长,280 nm;压力进样,0.6 psi,进样时间,6 s,运行缓冲液,SDS:正丁醇:正辛烷:硼砂溶液（pH 9.24,10 mmol/L）=3.3:6.6:0.8:89.3。以27个共有峰平均相对峰面积作为标准建立国产血竭MEEKC对照指纹图谱,利用夹角余弦和相关系数衡量4批国产血竭样品的相似度,均大于0.90,说明4种样品质量一致,结果与HPLC方法所得结论相同。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献查考
• 1.1 中药血竭简介
• 1.1.1 植物基源
• 1.1.2 血竭植物资源的研究
• 1.1.3 血竭化学成分研究现状
• 1.1.4 血竭药理活性的研究现状与临床应用
• 1.1.5 血竭现行质量控制标准
• 1.1.6 血竭质量控制研究现状
• 1.2 中药指纹图谱
• 1.2.1 中药指纹图谱研究现状
• 1.2.2 中药指纹图谱建立的原则
• 1.2.3 色谱指纹图谱的建立
• 1.3 实验方法设计与实用意义
• 第二章 国产血竭与进口血竭的快速鉴别
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 药材来源
• 2.2.2 实验试剂
• 2.2.3 实验仪器及设备
• 2.2.4 供试品溶液的配制
• 2.2.5 毛细管电泳分析方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 分离条件的优化
• 2.3.2 分析方法重现性、线性范围及检测限的研究
• 2.3.3 样品稳定性实验
• 2.3.4 样品测定及回收率
• 2.4 小结
• 第三章 国产血竭HPLC 指纹图谱的研究
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 药材来源
• 3.2.2 实验试剂
• 3.2.3 实验仪器及设备
• 3.2.4 实验方法
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 HPLC 条件的优化
• 3.3.2 提取方法的选择
• 3.3.3 指纹图谱的建立
• 3.3.4 国产血竭与进口血竭HPLC 色谱图比较
• 3.4 小结
• 第四章 国产血竭MEEKC 指纹图谱的研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 药材来源
• 4.2.2 实验试剂
• 4.2.3 实验仪器及设备
• 4.2.4 供试品溶液的制备
• 4.2.5 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 提取方法的选择
• 4.3.2 方法学考察
• 4.3.3 龙血竭及其制剂MEEKC 指纹图谱的建立
• 4.3.4 国产血竭HPLC 指纹图谱与MEEKC 指纹图谱的比较
• 4.4 小结
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 发表论文清单